158174. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 19 042 RP enziminhibitor és összetevői előállítására

•5 158174 6 E Hullámhossz l cm 21 052 RP 21 053 RP 200 nm 435 243 nm 530 (elnyelési minimum) 4,5 257 nm 2,9 (elnyelési maximum) 5,25 3,4 Infravörös színikép (meghatározva káliumbromidos keverékből). Ezek a színképek a 2. (21 052 RP és 3. (21 053 RP) ábrán láthatók; az,abszcisszán a felső skálán a mikronokban kifejezett hullámhossz, az alsó skálán a cm-1

egységekben kifejezett hullámszám, az ordinátán pedig az optikai sűrűség van feltüntetve. Az 1. táblázatiban közöljük a tót termék infravörös abszorpciós főbb vonalait. 1. táblázat 21 052 RP 3550 e 1525 v 1115 e 3200 e 1505 v 1030 v 2960 lk 1495.V 995 gy 2940 v 1470 gy 970 gy 2875 gy 1450 k 945 v 2740 v 1445 ngy 910 ngy 1730 v 1435 v 860 gy 1715 v 1390 k 740 k 1655 ne 1380 ogy 715 v 1640 fc 1250 gy 695 k 1545 e .. 1220 v 21 053 RP 615 e 3340 e 1505 v 1125-gy' 3260 v 1495 v ... 1100 k 3190 lk 1465 gy 1030 v 2960 ;k 1450 k 995 k 2940 v 1430 v 945 gy 2880 k 1390 k 910 gy 2750 V 1330 gy 860 gy 1735 v 1295 gy 740 v 1720 v 1230 k 720 v 1645 ne 1225 k 695 k 1545 e 1175 gy 630 v 1525 v 590 e. ne = nagyon erős, e = erős, k = közepes, gy — gyönge, ngy = nagyon gyenge, v = váll. , Optikai fotrgátóképesség (meghatározva 0,9%os vizes oldatból): Hullámhossz 21052 RP 21053 RP 589 nm (nátrium D vonala 436 nm 365 nm -22 ±1° -23,5 ±1° 10 15 20 25 30 40 45 50 55 60 Felszálló papírfcromatografálás során (Arches 302 papír) a 19 042 RP enziminhibiitoir és a 21 052 RP és 21 053 RP fő összetevői azonos módon viselkednek. A különféle kifejlesztő oldószerekkel kapott Rf értékéket a 2. táblázatban közöljük (kifejlesztés 20 C°-on, előhívás koloirimetrikus módszerekkel vagy az antibripszin vagy antikoaguláns hatás mérésével). 2. táblázat Kifejlesztő oldószer Rf 4:2:4 térfogatarányú butanol-eoeitsav-víz elegy 0,80 30:20:6:24 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegy 0,66 A 19 042 RP enziminhibitor és összetevői azonos módon viselkednek eleíktroforézis során,-és azonosíthatók oellulózaoetát 'hártyán ált történő ellektroforetilkus vándorlásuk alapján különféle pufferoldaitdkat alkalmazva: citrom sav-dinátriumfoszfát ; 2,2 pH, jx = = 0,09 ecetsav-nátriumacetát 4 pH, //. = = 0,1 5,5-dietilfoarbiturs'av 8,6 pH, ja. -= 0,075 nátriumhidroxid-íglicin 9,6 pH, /J, = - 0,1 -45,5 ±1,5° —46,511,5° -71 +2a

. —71,5 ±2° *,5 Az előhívás módszerei azonosak a kromatográfiában használtaikkal.. Függetlenül a puffer természetétől, a termék nagyobbik része a katód felé vándorol. Például 8,6 pH-nál' és 250 volt állandó feszültségnél (áramerősség 4—6 milliamiper) a vándorlás 30— 32 mm/30 nm. A 19042 RP enziminhibitoir atnitienziimatikus hatása a CIS0

értékével jellemezhető, azaz azzal a koncentrációval, amely adott enzimatikus reakciókörülmények között a jelenlevő enzim hatását 50%-kal inhibitálja. (3. táblázat). Az antienzimatikus hatást a következő módon határozzuk meg: Hivatkozások: A I. Traútsohold és E. Werle, „Methods of Enzymatic Analysis", H. U. Bergmeyer Ed., Acad. Press (1963) 880. oldal. B W. Rick, „Methods of Enzymatic Analysis", H. U. Bergmeyer Ed., Acad Press (1963), 815. oldal. • C uo., 811. oldal. ' D uo., 800. oldal. E uo., 819. oldal. F F. Markward't, K. O. Haustein és H. P. Klöc-king, Anch. Intern. Pharmacodynam., 152, 223 (1964). . G L. R. Christensen, • J. Clin. Invest. 28, 163 (1949). H D. L. Kline, „Methods in Enzymology", S. P. Colowidk és N. O. Kaplan Ed., _Acad. Press, II. kötet 156 (1955). I