158163. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezocisztreptamin származékok és savas addiciós sóik előállítására
158163 13 14 Jiatjuk és a komponenseket könnyen megkülönböztethetjük egymástól a tetra-N-acetil-származékok papírkromatografálása útján, futtatásra 1--butanol-piridin-5: °/o-os bórsav (6:4 3) elegyet 5 használva. A tetra-jN-acétil-ámbutirozin A R/ értéke 0,30—0,38 a tetra-N-acetil-ambutirozin B Rf értéke 0,16—0,20. A tetra-N-acetil-származékokat kimutathatjuk papíron, amennyiben Pan és Dutcher, Analytical .Chemistry, 28, 836 (1956) 10 általános módszerének módosított változatát használjuk, nevezetesen nátriumhipoklorit helyett klórgázt alkalmazunk. A fenti eljárásban használt tetra-N-acetil-származékok előállítása céljából 7,50 g ambutirozint feloldunk 150 ml 15 ecetsavhidridben és 430 ml metanolban. Az oldatot 48 órán át 25°-on tartjuk és a reakcióelegyet 3 liter dietiléterbe öntjük. A tetra-N-aeetilszármazékokból álló kapott csapadékot szűrőn elkülönítjük és szárítjuk. Az egyes komponensek 20 tetra-N-acetil-származékait hasonló módon kaphatjuk. - Az ambutirozint és komponenseit számos savval átalakíthatjuk gyógyszerészeti szempontból 25 elfogadható savas addíciós sókká, mint pl. ecetsavval, propionsavval, maleinsavval, maionsavval, citromsavval, glukonsavval, sósavval, hidrogénbromiddal, foszforsavval, kénsavval és hasonlókkal végzett reakció útján. 30 Az ambutirozin, annak összetevő komponensei és savas addíciós sói baktériumellenes szerek, amelyek széles spektrumú baktériumellenes aktivitással rendelkeznek. Különösen említésre 35 méltó tulajdonsága ezen vegyületeknek viszonylag nagyfokú aktivitásuk Pseudomonas aeruginosa ellen in vitro és in vivo egyaránt. A vegyületeket orálisan, parenterálisan vagy helyileg alkalmazhatjuk. Embereknél az ambutirozin-szul-40 fát egyszeri intramuszkuláris adagja, amely megfelel 4 mg ambutirozin bázisnak testsúly kg-ként, jól tolerálható és a vérplazmában valamint a vizeletben bakteriosztatikus gyógyszerkoncentrációt eredményez. 45 A széles baktériumellenes spektrum és a baktericid, valamint a bakteriosztatikus aktivitás miatt a találmány szerint előállított vegyületek baktériumellenes szerként in vitro is hasznosak, 50 pl- laboratóriumi berendezések és felületek sterilizálására, gyógyszerészeti termékek sterilizálására és steril körülmények fenntartására gyógyszergyártási műveletek alatt. Laboratóriumi eszközök és felületek sterilizálására, továb-55 bá hasonló in vitro történő alkalmazásra e vegyületeket 0,1—1,0%-os vizes oldat formájában használhatjuk. A találmányt a következő példák közelebbről mutatják be. 60 1. példa A fermentáció után a fermentleben jelenlevő ambutirozin mennyiségét csakúgy, mint a fermentációs periódus bármely időpontjában jelenlevő mennyiségét biológiai úton határozhatjuk meg. A fermentlé baktériumellenes aktivitását (ambutirozin tartalommal kifejezve) az Eschericia coli, vagy egyéb alkalmas mikroorganizmus növekedésére vonatkozó gátló koncentráció meghatározásával mérhetjük valamilyen lapos kísérleti edényben és az eredményt összehasonlítjuk azzal a gátlással, amelyet a tisztított ambutirozin, mint összehasonlító minta a megfelelő hígításban okoz; utóbbinak előállítását a későbbiekben írjuk le. A fermentációs periódus befejeződése után az ambutirozint vagy savas addíciós sóját a fermentléből az alábbiakban ismertetett módszerekkel nyerhetjük ki, és azt kívánt esetben további tisztítási műveletnek vethetjük alá, beleértve az ambutirozin A és ambutirozin B komponensekre való szétválasztást is. Az ambutirozint a fermentléből különféle módszerekkel nyerhetjük ki. Így pl. a fermentlevet ammónium formában levő karbonsav-gyantával kezelhetjük az ambutirozinnak a gyantára való adszorbciója céljából. A gyantát elkülönítjük és az ambutirozint valamilyen bázissal, mint pl. 1 mólos ammóniumhidroxid-oldattal végzett eluálással eltávolítjuk. Tisztítás céljából a gyantára történő abszorbciőt és a bázissal végzett eluálást egyszer vagy többször megismételhetjük. Az ambutirozint különféle módszerekkel választhatjuk szét az ambutirozin A és ambutirozin B komponensekre. Egy előnyös módszer abból áll, hogy az ambutirozint egy borát formában levő erős anioncserélő gyantára adszorbeáltatjuk, ezt követően a komponenseket szelektív módon eluáljuk. A szelektív eluálással történő elválasztás valószínűleg azon alapszik, hogy az ambutirozin B a ribóz-gyökben egymás mellett levő cisz-hidroxil-csoportokkal rendelkezik- és borátkomplexet képez, ugyanakkor az ambutirozin A-nak nincsenek a xilózgyökben egymás mellett levő cisz-hidroxil-csoportjai és nem képez borátkomplexet. Ha az ambutirozint adszorbeáltatjuk egy borát formában levő erős anioncserélő gyantára, úgy előbb az ambutirozin A komponenst vízzel történő eluálással, majd az ambutirozin B komponenst ezt követően 5%-os bórsavoldattal való eluálással távolíthatjuk el. Mind a két komponenst tovább tisztíthatjuk ammónium^formában levő karbonsavgyantán való adszorbcióval és 1 mólos ammóniumhidroxid-oldattal történő eluálással. Á maradék bórt a termékből egy borra nézve specifikus anioncserélő gyantával távolíthatjuk el. Az ambutirozinnak komponenseire történő elválasztására szolgáló másik módszer értelmében az ambutirozin-keveréket átalakítjuk tetra-N-acetil-származékokká és ezeket diatótnaföldön megvalósított megoszlásos kromatográf iának vetjük alá 1-butanol-víz-piridin (10 : 10 : 3) vagy l-butanol-5%-os bórsav-piridin (10:10:3) elegyet használva. A két komponens elegyét elválaszt-I. lépés: 4 tenyészetet készítünk a Bacillus circulans NRRL B—3313 törzsből ferde, steril agar-65 táptalajon, melynek összetétele az alábbi. 7
