158137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-karboxi-anhidridek és azok származékainak előállítására

158137 37 38 adunk az elegyhez. Egy perc eltelte után a pH-tkénsav hozzáadásával 3-ra csökkentjük, majd 5 percen át nitrogént buborékoltatunk át az elegyen. A pH-t 7-re állítjuk be, és az elegyet fagyasztva szárítjuk. A szilárd maradékot metanollal háromszor extraháljuk, majd a metanolos extraktumokat szilikagélen adszorbeáltatjuk és kiszárítjuk. Ezután a szilikagélt izopropanollal készített szilikagél-oszlopra visszük fel. Az oszlop előhívását metanol, víz és ammónia 80:18:2 arányú elegy ével végezzük. így a kívánt terméket különítjük el. 37. példa N-Karboxi-arginin-anhidrid-hidroklorid előállítása 30 ml Na-benziloxikarbonil-arginin 0,25 ml benzollal készített oldatához 1 ml tionilkloridot adunk, és az elegyet keverjük. Üvegbottal végzett kaparás és keverés közben az elegyet kb. 30 másodpercen át gőzfürdőn melegítjük, majd szobahőmérsékleten hűtjük, és a benzol és a tionilklorid feleslegét dekantáljuk. A maradékot kétszer mossuk benzollal és egyszer petroléterrel, • majd vákuumban szárítjuk. Ilyen módon termékként N-karboxi-arginin-anhidrid-hidrokloridot kapunk. A hidrobromid-sót hasonló módon kapjuk, ha a tionilkloridot ekvivalens mennyiségű tionilbromiddal helyettesítjük. Hasonló módon kapjuk az N-karboxi-hisztidinanhidrid-hidrokloridot és -hidrobromidot. 38. példa N-Karboxi-arginin^anhidrid-hidroklorid előállítása 4 g benziloxikarbonil-arginint szuszpendálunk kb. 5 ml benzolban, majd 17 ml tionilkloridot adunk a szuszpenzióhoz. A reakcióelegyet fél órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd a tionilklorid feleslegét dekantáljuk. A maradékot először 50 ml benzollal, majd 50 ml hexánnal mossuk. A mosott maradékot szobahőmérsékleten vákuumban szárítjuk, majd 20 ml tionilkloridot adunk hozzá. A reakcióelegyet gőzfürdőn kb. 80 C°-ra melegítjük, a tionilklorid fölöslegét eltávolítjuk, és a maradékot egymást követően mossuk 50 ml benzollal, majd 50 ml hexánnal. A kapott N-karboxi-argiriin-anhidrid-hidrokloridot olyan módon tisztítjuk meg, hogy feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, az elegyet centrifugáljuk, dekantáljuk, 30 ml etilacetát hozzáadásával csapadékot képzünk, ismét centrifugáljuk, majd az oldószert dekantáljuk. 39. példa N-Karboxi-hisztidin-anhidrid-hidrobromid előállítása 5 ml tetrahidrofurán és 4 millimól benziloxikarbonil-hisztidin elegyéhez hozzáadunk 8 millimól foszfortribromidot, és az elegyet szobahőmérsékleten keverjük. Kb. 5 perc eltelte után oldatot kapunk. A keverést további 5 percen át folytatjuk. A kicsapódott N-karboxi-hisztidinanhidrin-hidrobromidot szűréssel elkülönítjük. Hasonló módon állítunk elő N-karboxi-hisztidin-anhidrid-hidrokloridot, azonban a foszfotribromidot ekvivalens mennyiségű foszfortrikloriddal helyettesítjük. 40. példa Arginil-profil-fenilalanin előállítása Ez a példa az N-karboxi-arginin-anhidrid-hidroklorid felhasználását illusztrálja az arginil-prolil-fenilalanin tripeptid előállítására. Összesen 1,68 millimól prolil-fenilalanint oldunk 70 ml, 60 g jeget tartalmazó, 9,5 pH-jú káliumborát-pufferben, majd 15 ml dimetilformamidban oldva 4 millimól N-karboxi-arginin-anhidrid-hidrokloridot adunk az elegyhez. 30 másodpercen át 3 C°-on keverjük a reakcióelegyet, majd a közbenső termékként kapott N-karbamát dekarboxilezése céljából a pH-t kénsav hozzáadásával 5,6-ra állítjuk be. Az elegyet 25 ml-es szén-oszlopra öntjük, majd az oszlopot 300 ml vízzel mossuk, és 5% ecetsavat tartalmazó 50%os vizes acetonnal elúáljuk. Az aceton és az ecetsav elegyét csökkentett nyomáson lehajtjuk. A maradékot metanol és ammónia 9:1 arányú elegyének minimális mennyiségében felvesszük. Az így kapott szilikagél oszlopon elnyeletjük, majd ugyanazzal az oldószerrel elúáljuk, és 15 ml-es frakciókban fogjuk fel az eluátumot. A kívánt terméket az 5—9-es frakciók egyesítésével és az oldószernek csökkentett nyomáson való bepárlásával kapjuk. 41. példa Hisztidil-fenilalanin előállítása Ez a példa N-karboxi-hisztidm-anhidrin-hidrobromid felhasználását mutatja dipeptid-előállításban. 10 ml 9,5-ös pH-jú káliumborát-pufferben öszszesen 1 millimól fenilalaninhoz 1 millimól N-karboxi-hisztidin-anhidrid-hidrokloridot adunk, és az elegyet kb. egy percen át 0 C°-on keverjük. Kénsav hozzáadásával a pH-t 3-ra állítjuk be, és így a közbenső termékként képződött karbamátot dekarboxilezzük, miközben nitrogént vezetünk át az elegyen. A kívánt terméket kromatográfiai úton különítjük el. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 IS