158137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-karboxi-anhidridek és azok származékainak előállítására

35 158137 36 33. példa N-Klorimerkuri-hisztidin-N-karboxianhidrid előállítása. Káliumhidrogénkarbonát és káliumkarbonát 2 : 3 arányú keverékéből 25,0 g-ot tartalmazó egy liter vízhez 15,52 g L-hisztidint adunk. A kapott elegyhez gyors keverés közben hozzáadunk 54,30 g higany(II)-kloridot, enyhe melegítés mellett. A hőmérsékletet kb. 65 C°-ra emeljük, és a keverést folytatjuk, miközben a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk lehűlni. Az N-kloromerkuri-hisztidinből álló csapadékot leszűrjük. Az így előállított termékből összesen 29,44 g-ot kb. másfél órán át keverünk 100 ml száraz acetonnal. így finom szuszpenziót képezünk. További 100 ml aceton hozzáadása után a reakcióelegyet jégen lehűtjük, miközben kb. 40 percen át feleslegben foszgént vezetünk keresztül az elegyen. A jeget eltávolítjuk, és 2 ml higanyt adunk a reakciőelegyhez. A képződött csapadékot szűréssel eltávolítjuk, és a szüredéket csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószer eltávolítása céljából. A visszamaradó kívánt terméket 100 ml metiletilketonal felvesszük, amelyben hűtéskor kiválik. A csapadékot szűrjük kis mennyiségű további hideg metiletilketonnal, majd benzollal mossuk, és további terméket is nyerünk olyan módon, hogy gondosan benzolt adunk a metiletilketonos anyagokhoz. Az alábbi vegyületeket hasonló módon állítjuk elő. Mindegyik esetben úgy alakítjuk át a kiindulási aminosavakat halomerkuri-sóvá, hogy a kiindulási aminosav 0,1 mólját vizes közegben, 8—9-es pH-n a fentebb leírt eljárással reagáltatjuk 0,2 mól higany(II)-kloriddal vagy bromiddal. A halomerkuri-sót elkülönítjük, és acetonban vagy metüetilketonban alakítjuk át az anhidriddé. A két első vegyületet 0 C°-on, a további öt vegyületet pedig 10 C°-on állítjuk elő: N-klórmerkuri-arginin-N-karboxianhidrid N-klórmerkuri-lizin-N-karboxianhidrid N-klórmerkuri-ornitin-N-karboxianhidrid N-brómmerkuri-arginin-N-karboxianhidrid N-brammerkiuri-lizin-N-Hkarboxianhidrid N-brómmerkuri-ornitin-N-karboxianhidrid N-brómmerkuri-hisztidin-N-karboxianhidrid. 34. példa-Hisztidíl-alanin-előállítása Összesen 90 ml alanint oldunk 25 ml 0,2 mólos EDTA puff ériben, 10-es pH-n, és 1,292 g N-klórmerkuri-hisztidin-N-kiarboxianhidridet adunk gyorsan hozzá 0 C°-on, gyors keverés közben, öt perc eltelte után az elegy pH-ját tömény kénsav hozzáadásával 2,5-re csökkentjük. A higany kicsapása céljából hidrogénszulfidot buborékoltatunk át az elegyen, majd a csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szüredéket nitrogénnel megtisztítjuk a hidrogénszulfidtól és egyéb gázoktól, majd 50 ml térfogatra hígítjuk. Híg nátronlúg hozzáadásával a pH-t kb. 8-ra állítjuk be, majd az oldatot szénnel töltött oszlopon való átvezetéssel sómentesítjük. A kívánt terméket kromatográfiai úton különítjük el, szilikagél oszlopon való átvezetés és 1:9 arányú ammónia-metanol eleggyel végzett eluálás útján. 35. példa Lizil-alanil-leucil-glicil-izoleucin előállítása Összesen 368-mg alanil-leucil-glicil-izoleucint felveszünk EDTA puffert tartalmazó, 8-as pH-jú vízben, majd gyors keverés közben 1,68 g N-kloromerkuri-lizin-N-Tkarboxianihidridet adunk hozzá 3 C° hőmérsékleten. 30 másodperc eltelte után az elegy pH-ját tömény kénsav hozzáadásával 2-re csökkentjük. A higanyt hidrogénszulfid átbuborékoltatásával szulfidként kicsapjuk, majd szűréssel eltávolítjuk. A visszamaradó hidrogénszulfid és széndioxid eltávolítása céljából nitrogént buborék oltatunk át a. szüredéken. Ezután ä szüredéket 150 ml-re hígítjuk, és a pH-t híg nátronlúg hozzáadásával 8,5-re állítjuk be. Az oldatot szénnel töltött oszlopon való átvezetéssel sómentesítjük, és a kívánt terméket szilikagél-oszlopon kromatográfiai úton különít- jük el. 36. példa Glicil-arginil-glicil-fenilalanil-lencin előállítása 4,0 millimól leucin és 20 ml víz elegyéhez 0 C°on hozzáadunk 3,1 millimól N-karboxi-fenilalanin-anhidridet, miközben a pH-t báriumhidroxid-por időnkénti hozzáadásával 10,5-ös értéken tartjuk. A reakció egy perc alatt teljesen végbe megy. 10%-os kénsav hozzáadásával a pH-t 3,5-re állítjuk be. A kicsapódó báriumszulfátot szűréssel eltávolítjuk, és a fenilalanil-leucint tartalmazó szüredéket —3 C° hőmérsékleten 3,2 millimól N-karboxi-glicin-anhidriddel kezeljük, miközben a pH-t báriumhidroxid hozzáadásával 10,5-ös értéken tartjuk. Tömény kénsavval a pH-t 3,5-re állítjuk, és így lefolytatjuk a dekarboxilezést, majd a kicsapódott báriumszulfátot szűréssel eltávolítjuk. A szüredék pH-ját EDTA pufferral 9,5-re állítjuk be, majd gyors keverés közben 1,15 g N-bromomerkuri-arginin-N-karboxianhidridet adunk az elegyhez +5 C° hőmérsékleten. Két perc eltelte után a pH-t tömény kénsav hozzáadásával 2-re állítjuk be, majd a higanynak szulfidként való kicsapása céljából hidrogénszulfidot buborékoltatunk át az elegyen. A csapadékot szűrjük, majd a szüredéket nitrogénnel átöblítjük, és a pH-t 40%-os kálilúggal 10-re állítjuk be. A reakcióelegy hőmérsékletét 0 C°-ra csökkentjük, majd gyors keverés közben 3,5 millimól N-kafboxi-glicinanhidridet 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 18