157970. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum-komplex előállítására
11 1. példa: 2 db 300 ml-es Erlenmeyer-lombikba a következő összetételű táptalajból 60 ml-t töltöttünk: dextrin 3 % kazein 0,5 % kalciumkarbonát 0,4 % ammóniumszulfát 0,1 % gabonaáztatólé 1 % csapvíz 100-ra A sterilezést autoklávban végezzük, 20 percen át 120 C°-ra való felmelegítéssel. A sterilezés után a táptalaj pH-értéke 6,8—7 között váltakozik. Mindegyik lombikot beoltjuk 0,5 ml spóraszuszpenzióval, amelyet úgy kaptunk, hogy a Streptomyces lisandri glukóz-burgonyás ferde agáron növesztett 15 napos tenyészetének felületét 4 ml steril desztillált vízzel lemostuk. A lombikokat 28 C°-on 48 órán át rázattuk egy 3 cm excentricitású forgó-rázógépen. 2 ml ilyen tenyészetet használtunk fel további 300 ml-es lombikok beoltására, amelyek a következő termelő táptalaj 60 ml-ét tartalmazták: keményítő 4,5 % szójaliszt 2,2 % gabonaáztatólé 2,3 '% kalciumkarbonát 0,4 % riátriumklorid 0,5 % csapvíz 100j ra A sterilezés 20 percen át tartó, 120 C°-ra való félmelegítéssel történik. A lombikokat 28 C°-on az előzőkben a vegetatív tenyésztéssel kapcsolatban leírt módon tenyésztjük. 120 órás tenyésztés után 50 : ug antibiotikumok omplex/ml tenyészfoilyadék aktivitást érünk él. 2. példa Az eljárást az 1. példában megadott módon viteleztük ki. A termelő fázisban a következő táptalajt alkalmazzuk: oldható keményítő 8 % gyapotmagliszt 4 % gabonaáztatólé 2,5 % lardolaj 1,5 % kalciumkarbonát 1 % aimmóniumszulfát 1 % mangánszulfát 0,01 % kobaltszulfát 0,0007 % csapvíz 100-ra A pH-értéket 4 N nátriumhidroxid-oldattal 6,2-re állítjuk be. 12 A sterilezést 120 C°-ra való, 20 percen át tartó felmelegítéssel végeztük. Kevertetés mellett 28 C°-on, az 1. példában leírt módon végezzük a tenyésztést. 120 órás tenyésztés után 70 ug 5 komplex/ml tenyészfolyadék aktivitást érünk el. 3. példa 10 Két 300 ml-es Erlenmeyer-lombikban a következő összetételű táptalajt készítjük el: dextrin 5 .% kalciumkar bonát 0,5 % gabonaáztatólé 1 % kazein 1 % ammóniumszulfát 0,2 % szék. káliumfoszfát 0,01 % csapvíz 100-ra A sterilezést 20 percen át tartó 120 C°^ra való melegítéssel végezzük. Sterilezés után a táptalaj pH-értéke 6,7—7 között váltakozik. A lombikokat 1 ml spóraszuszpenzióval oltjuk be, 25 amelyet úgy állítottunk elő, hogy Streptomyces lisandri 15 napos, glukóz-burgonyás ferde agáron fenntartott tenyészetének felületét 5 ml steril desztillált vízzel lemostuk. 30 A lombikokat 28 C°-on 48 órán át tenyésztjük az Lés 2. példában megadott rázatási körülmények között. 2 ml így előállított tenyészetet használtunk fel további 300 ml-es lombikok beoltására, ame-35 lyek a következő összetételű termelő táptalajból 60 ml-t tartalmaztak: glukóz 6 % szójaliszt 3 % gabonaáztatólé 2 % kalciumkarbonát 1 % nátriumklorid 0,3 % szójaolaj 0,05 % csapvíz 100 -ra A sterilezés 120 C°-on történik, 20 percen át. Sterilezés után a táptalaj pH-értéke 6,2—6,8 között váltakozik. A lombikokat 28 C°-on tenyésztjük az 1. és 2. példában megadott rázatási kö-50 rülmónyek között. 120 órás tenyésztés után 120 /ig komplex/ml tenyészfolyadék aktivitást kapunk. 4. példa 55 120 C°-on 20 percen át való hevítéssel sterilezünk egy 2000 ml-es lombikot, amely három habtörő-berendezéssel és egy oldalsó oltócsonkkal rendelkezik és 500 ml-t tartalmaz a 3. pél-60 dában a vegetatív fázissal kapcsolatban leírt táptalajból. Lehűlés után a lombikot beoltjuk egy olyan spóraszuszpenzió teljes mennyiségével, amelyet úgy kaptunk, hogy négy 15 napos glukóz-burgonyás ferde agáron kifejlődött te-65 nyészet felületét desztillált vízzel lemostuk. 6
