157600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofaginok előállítására
157600 3 4 Éiesztőkivonat-malátakivonat-agar: Igen fejlett, porszerű, zöldes-sárga légmicélium. Világos sárga, gyűrt, fejlett szubsztrátmicélium. Világos sárga oldódó pigment. Tirozin-jagar: Vöröses szürke, majd sárguló, 5 fejlett, poirszerű légmicélium. Sárga, gyűrt szubsztrátmicélium. Oldódó pigment nincs. Ne-_ gatív melanin-reakció. Pridham—Gottlieb glükóz-'agar: Közepesen fejlett, porszem, Világos szürke légmicélium. 10 Színtelen, miajd sárguló, fejlett szubsztrátmicélium. Oldódó pigment nincs. , Burgonya-agar: Erőteljesen fejlett, szürkés sárga, porszerű légmicélium. Pejlett, gyűrt, ráncos, elérik sárga szubsztrátmicélium. Világos 15 sárga oldódó pigment. Szacharóz-nitrát-agar: Légmicélium nyomokban. Színtelen, alig növekedő szubsztrátmicélium. Oldódó pigment nincs. Glukóz-aszparagin^agar: Fejlett, porszerű, 20 zöldes-sárga légmicélium. Gyenge világos sárga szubsztrátmicélium. Halvány sárga, oldódó pigment. Gauze-féle keményítő-agar: Erőteljes, porszerű, zöldes sárga légmicélium. Világos sárga, 25 majd lassan barnuló, fejlett szubsztrátmicélium. Világos sárga, oldódó pigment. Glicerin-gliokoll-agar: Erőteljes, világos sárga, porszérű légmicélium. Fejlett, világos sárga, 30 oldódó pigment. Szintetikus-agar: Fejlett, porszerű, zöldes sárga légmicélium. Színtelentől halvány sárga, gyengén fejlett szubsztrátmicélium. Gyengén sárga, oldódó pigment. 35 C-forrás értékesítési spektrum Pridham-Gottlie'b szintetikus tápközegén: (— = növekedés és értékesítés nincs; + = növekedés nyomokban; + = gyenge; ++ = közepes és + + + = erőteljes fejlődés, + + + + = igen erős fejlődés, ill. 40 hasznosítás): d-glükóz (poz. kontr.) + + + + d-mannit: + + +; mozit: —; arabinóz: + + ramnóz: -f- + ; keményítő: + + + +; szacharóz —; raffinóz: —; d-fruktóz: + + + +; d-xilóz + + ; C nélkül (neg. kontroll): •—. 45 Mikromorfológia: a sporofórok szimpodiális elágazással, tincsékben seprű alakú csomókban helyezkednek el, minden táptalajon 99%-ot meghaladó rectus flexibilis aránnyal és kevés 50 retinaculum apertummál. A szubsztrátmicélium nem tagolódik, oidiospórát, sporangiumot és sclerotiumot nem képez. A közölt leírásból kitűnik, hogy az S—298 jel- £5 zésű törzs a Streptoimyces griseus fajcsoportba tartozik (Szabó István: Acta Microbiol. Hung. 13, 47 [1966]). A fajcsoport egyetlen tagjával sem azonos, éért az S—298 jelzésű sugárbomba törzset Streptomyoes griseus var. grizeofagini- 60 nak neveztük el. A találmány eljárás grizeofaginok előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyoes griseus var. griseofagini törzset (az Országos Köz- na egészségügyi Intézetnél letétbe helyezve 46. szám alatt 1968. július 1-én) komplex fehérjét, szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon aerob ' körülmények között fermentálunk, majd a tenyészetből a felhalmozódott grizeofagin komplexet extrakciós vagy kromatográfiás módszerrel elkülönítjük, és adott esetben komponenseire bontjuk. A Streptomyces griseus var. griseofagini törzs tenyésztésére a sugárgombák tenyésztésére szolgáló általánosan ismert módszereket alkalmazhatjuk. A tenyésztésnél C-forrásként előnyösnek bizonyult a glükóz, dextrin, melasz és keményítő. A N-források közül a szójaliszt alkalmazható legcélszerűbben; kedvező hatású az antibiotikum-termelésre a szójaliszttel kombinált kukoricalekvár és kazein-hidrolizátum. Ásványi sóként NaCl-t, (NH4) 2 S0 4 -ot, CaC0 3 -ot stb. alkalmazhatunk. Nyomelemek (pl. Zn, Mg, Mn, Co és Fe) hozzáadása a táptalajhoz nem szükséges^ mert a csap víz és a nem tisztított táptalaj-alkotórészek ezeket a szükséges mennyiségben már tartalmazzák. A táptalaj sterilezését 120 C°-on 1 órán keresztül célszerű végezni. Asterilezés előtt a pH-t célszerű 7,0-ra állítani. A steril táptalajt a Streptomyces griseus var. griseofagini spóraszuszpenzióval vagy vegetatív inakuiumával oltjuk be. A nagyobb térfogatú (50—100 literes) táptalajok oltására célszerű vegetatív inokulumot használni; így elkerülhető, hogy a termelés túl hosszú növekedési (logaritmikus) fázis után induljon meg. A vegetatív inokulurn készítéséhez használt táptalaj a fermentációs táptalajjal azonos vagy attól eltérő lehet. Az inokulurn mennyisége előfermentációnál a beoltásra kerülő táptalaj térfogatának 0,1%-a, főfermientációriál 5—-10%-a. Levegőztetés 100 Á/perc, keverés 1/1 v/v. A grizeofagin komplex termelése bármely hőmérsékleten végbemegy, amelyen a Streptomyces griseus var. griseofagini kielégítő növekedése érhető el (24—32 C°); előnyös a hőmérsékletet 26—30 C° között tartani. A táptalaj általában a neutrálishoz közel álló pH-értékeket mutat a fermentáció folyamán. A fermentáció korai szakaszában az erjesztéses oldat pH-ja az enyhén savas (5,5—6,0), késői szakaszában az enyhén lúgos (7,5—8,0) pH-érték felé tolódik el. A grizeofagin termelés a 80—120. órában éri el a maximális értéket. Az antibiotikum a pH 4-en szűrt erjesztéses oldatban halmozódik fel, melyből legelőnyösebben extrakciós módszerrel vonható ki. Az extrahálást célszerű pH 7—8 között végezni, valamely vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, etilacetáttal, kloroformmal, butanollal, benzollal stb. Az antibiotikum az oldószeres kivonat bepárlási maradékából petroléteres vagy n-hexános ki csapással állítható elő. A leszűrt erjesztéses oldatból az antibiotikum kationcserélő gyantán is megköthető. Előnyösen 2
