157501. lajstromszámú szabadalom • Eljárás citotetrinek előállítására

17 157501 18 Beltenyésztett CBA egértörzsön, intravénás adás mellett a citotetrin komplex és az egyes komponensek akut toxicitási értékei (LD50) a következők: citotetrin komplex citotetrin A citotetrin B citotetrin C citotetrin D citotetrin E 0,9 mg/kg 1,2 mg/kg 1,2 mg/kg 1,9 mg/kg 6,0 mg/kg 5,0 mg/kg Valamennyi citotetrin komponens rendelkezik rákellenes hatással. A legjelentősebb hatása az A, B és C komponenseknek van. A citotetrin gátolja a kísérleti állatokban egyes transzplantálható tumorok növekedését. Így hatásos a patkányok Yoshida subcutan és ascites sarcomájára, és Walker subcutan carcinomájára, valamint egerek S—180 subcutan sarcomájára. Kismértékben hatásos az NK/Ly-lymphoma, LA leukémia és a Shay tiholoroleukémia ellen is. Citotoxikus hatása különböző daganatsejteken mind in vitro mind in vivo bizonyítható. A fenti adatokból világosan kitűnik, hogy a citotetrin, illetve annak egyik komponense sem azonos egyetlen eddig leírt antibiotikummal sem. 1) Egyetlen olyan antibiotikum sem ismeretes a nogalamicinen és a ruticulomicinen kívül, melyek ultraibolya elnyelési színképe megegyezne vagy hasonló lenne a citotetrinéhez. A citotetrin és a fenti két antibiotikum ultraibolya spektrumának maximum-értékei és a görbe menete igen hasonló, a maximumok helyében, de külö-^ nősen az extinkció-értékekben azonban már határozott különbségek mutatkoznak. Különösen nagy az eltérés a nogalamicin és a citotetrin alkalikus közegben felvett ultraibolya színképének maximum-értékei között: a nogalamicin maximumai 240, 322 és 553 nm-nél találhatók, míg a citotetrin esetében e maximum értékek 242, 294 és 545 nm-nél vannak. 2) A nogalamicin és ruticulomicin 1,97, illetve 1,84% nitrogént tartalmaz, míg valamennyi citotetrin komponens 3,2%-nál több nitrogént tartalmaz. 3) A citotetrin komponensek infravörös színképének egyikében sem található meg a nogalamicin, illetve ruticulomicin észtercsoportjára jellemző 1740 cm-i-nél található sáv. Ezzel szemben a citotetrin A, B és C komponensekben 1550 cm~i-nél jelentkezik a fenti két antibiotikumra nem jellemző, igen intenzív sáv. 4) A nogalamicin metanolban és etanolban nem oldódik, mely oldószerékben a citotetrin igen jól oldható. 5) A citotetrin A, B és C olvadáspontjai 212— 214, 216—217, 196—197 C°, míg a nogalamiciné 195—198, a ruticulomicin A és B-é pedig 183— 184, illetve 179—180°. 6) A B. subtilie-szel szembeni minimális gátló koncentrációk a citotetrineknél 0,3—1,2 ,«g/ml 10 15 20 25 80 35 40 45 50 55 60 65 körül vannak, míg a nogalamicinnél ez az érték 50 jug/wl. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Glükóz — burgonyás ferde agar tenyészeten fenntartott Streptomyces griseoflavus „CBS Cifferi" törzs kultúráról kapott spóraszuszpenzióval (csíraszám: 2—3-106/ml) 500 ml-es Erlenmeyer lombikban levő 100 ml-nyi steril táptalajt oltunk be. Az oltáshoz 1 ml spóraszuszpenziót alkalmazunk. A táptalaj összetétele a következő; Szójaliszt 20 g/liter Glükóz 30 g/liter Kukoricalekvár (szárazanyag) 5 g/liter Kazeinhidrolizátum 1 g/liter (kazeinre számolva) Nátriumklorid 3 g/liter Kalciumkarbonát 5 g/liter A tenyészetet rázógépen (fordulat: 280/perc/2 cm) 48 órán át 28°C-on inkubáljuk, majd 200 ml ily módon kapott tenyészettel, melynek színe pirosas rózsaszínű, 50 liternyi steril táptalajt oltunk be. Ezen inokulum-táptalaj összetétele a következő: Szójaliszt 20 g/liter Glükóz 30 g/liter Kukoricalekvár (szárazanyag) 5 g/liter Kazeinhidrolizátum 1 g/liter (kazeinre számolva) Nátriumklorid 3 g/liter Kalciumkarbonát 5 g/liter Pálmaolaj (habgátló) 5 g/liter Az inokulum tenyésztését keverés és levegőztetés mellett, steril körülmények között, 28°C-on 48—60 órán át folytatjuk. A keverés intenzitása 250 fordulat/perc, levegőztetési sebesség 1/1 v/v. A beérett inokulum világos piros színű, rózsaszín árnyalattal. Ezt az inokulumot használjuk fel a termelő fermentáció táptalajának oltásához. A termelő fermentáció táptalajának összetétele a következő: Szójaliszt 25 g/liter Glükóz 80 g/liter Kukoricalekvár (szárazanyag) 5 g/liter Kazeinhidrolizátum 1 g/liter (kazeinre számítva) Nátriumklorid 5 g/liter Káliumnitrát 3 g/liter Pálmaolaj (habgátló) 5 g/liter Az oltáshoz használt inokulum mennyiség 7— 10%. A táptalaj alkatrészeit a káliumnitrát kivételével csapvízben oldjuk, illetve szuszpendáljuk; amennyiben szükséges, a pH-t nátriumhidroxid-9