157483. lajstromszámú szabadalom • Eljárás urikáz előállítására

157483 15 16 savalt tartalmazó oldatot adunk a 2. és 4. próbaeső tartalmához. Ezután a próbficsöveket 10 percen át 30 C°-on inlkübáljuk éis a reakciót 0,2 M sósav beadagolásával leállítjuk. UV spektrofotométeren 185 m JU hullámhosszon a 2. és 4. sz. csövet a megfelelő 1. és 3. csővel összehasonlítva megvizsgáljuk. Az 1. és 2. cső meghatározott számú méréshez vakpróbaként szolgál, míg a 3. és 4. cső jelenti a tulajdonképpeni mérést. C. Számítások Etalonként 50 vagy 10 e/mg titerüvel egyenértékű urikáz görbéjét használjuk. A görbét olyan mérés eredményeként vettük fel, melynél az enzimet négy különböző hígításban alkalmaztuk. Ennél az ebalonnál az abszcisszán az enzim konoentráció éritéke és az ordinátán a hígított oldatoknál az urikáz hatására fellépő optikai sűrűségek vannak feltűntetve. Erre a görbére rávezetjük a kísérleteknek megfelelő optikai sűrűséget és az abszcissza-tengelyen leolvassuk az összehasonlító 'termék hígulását, mely 2 ml alkalmazott hígított oldat aktivitásával egyenértékű. Egy rövid számítással minderikor megállapítható az oldat vagy a kiinduló anyag aktivitása. Példa Etalon: 50 e/mg. Az alkalmazott etalon oldat koncentrációja 10/^cg/ml : 0,5 e/ml. Ezerszeres hígítás után a kapott optikai sűrűség a hígított oldat 2 ml mennyiségének aktivitása után számítva 0,500-el egyenlő. Ez a sűrűség a standard görbén 1 ml etalon oldat hatásának felel meg. Képletben kifejezve ez 0.5 e x 1 x 1000 250 e/mi Ez a gyors rruannyiségi meghatározás használható mind a gyantás folyamán a termék, mind pedig a végtermék aktivitásának megállapítására. Egy pontosabb mérési eljárás, melynél pl. négy hígítást veszünk ós amely lehetővé teszi minden egyes termiek akciógörbéjének meghatározását, a tisztított termékek pontos mennyiségi meghatározására használható. Jó konzerválási és kezelési lehetősége következtében a találmány szerinti új urikáz és főleg az előbbiekben ismertetett példák szerint előállítható termékek siteril környezetben szokványos feltételek között olyan vizas oldatból liofilizálhatók, melyet előzetesen sterilizáló szűrőn bocsátunk, át. A mikrobiológiai eredetű, előzőekben leírt urikáz gyógyászati tulajdonságait a következő műö veletek segítségével határozzuk meg: 1. Az urikáz adagolása csirkéknek intraperitoneálisan és intravénásán lehetővé teszi a vér húgysavszintjére gyakorolt hatás megállapítá-1() sát: nevezetesen 20—30 egység/kg intravénás adagolásnál a húgysavszint 70° o-os csökkenése érhető el, mely legalább 2 órán át tart.. Az 1. ábra (26 urikáz egység/kg intrapeiitoneáilís adagolás) és a 2. ábra (az a/ — g/ görbék sorrend-15 ben 8, 17, 20, 23, 34, 45 és 220 urikáz egység/kg intravénás adagolás) ezeket az eredményeket grafikonon ábrázolja, éspedig a húgysavszint csökkenését eredeti értékének %-ában kifejezve az ordináta tengelyen, míg az órában kifejezett időt az abszcissza tengelyen tűntettük fel. 20 2. Az urikázt kutyákba adagoljuk. Ennek során, mivel ezeknek az állatoknak a vérében húgysav nam található, az urikáz-aktivitás vizsgálatát a plazmában végeztük, az urikáznak az 25 állatokba injekció formájában történt bejuttatása után. Megállapítottuk, hogy az enzim a vérben több mint 24 órán át megmarad, intravénás, intramuszkuláris vagy szubkultán bejuttatás esetén is. 30 A kutyáknál húgysavszint nem állapítható meg, mivel májukban található urikáz, ezért a gomba vagy baktérium -eredetű urikáz vizsgálatát olyan kutyákon végeztük, melyeknél a máj 25 keringési funkciójának"kizárásával létesítettünk normál húgysavszintet. Ilyen körülmények között azonnal fokozott húgysavszint jelentkezik és megállapítottuk, hogy a gomba- vagy baktériumeredetű urikáz bejuttatása ennek a húgysiavszint-40 nek igen nagymértékű süllyedését, sőt úgyszólván teljes kiküszöbölését eredményezi, amint azt a 3—6. ábrák szemléltetik. A 3—5. ábrán, melyeken az órában kifejezett időt az abszcissza tengelyen tűntettük fel (logaritmikus skála), az uri-45 káz (aktivitás egységeinek számát plazma ml-ben fejeztük ki, mely az új urikázzal kezelt, nem érzéstelenített kutya plazmájának aktivitását mutatja a C — E-vél (3. ábra) és az F — H-val (4. ábra) jelzett kutya esetében. Az urikázt (intravé-50 násan) 38, (intramuszkulérisan) 76, illetve (szubkután) 152 egység/kg adagokban juttattuk be. A 6. ábra az urikáz (110 egység/kg; intra vénásan) hatását a húgysavszintre olyan kutyáknál szemlélteti, mélyeknél a májfunkciós tevékeny-55 séget kizártuk. Ezen az ábrán ^cg/ml-ben kifejezett húgysavszintet az ordinátára visszük fel, míg a percben (kifejezett időt az abszcissza tengelyen tűntetjük fél. Az 1 ési 2 görbék végpontjai az 1 és 2-val jelzett kutyák exiitus-áit jelzik. 60 3. Az urikáz semmi említésre méltó hatással sines a kutyák vérnyomására, szívverésére, a szív elektromoisságtermelésére, a különböző vegyi hatásokra jelentkező feszültségekre, a légző-65 szervek mozgására. Ugyancsak senumiiyen hatás 8