157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
43 majd a pH-t kénsavval 4-re csökkentjük 2 C°on, imiközben nitrogént buborékoltatunk át 20 percen keresztül az elegyen. A termékként kapott glicil-epinefrint nem különítjük el. Az alábbi táblázat azt az eljárást írja le, amelynek segítségével a glicil-epinefrint a végtermékké alakítjuk. NCA mmól pH Hőm. Idő — C02 C° pH VAL 3,1 10 2 1 pere 3 ILEU 3,4 10,5 0 45 másod- 4 perc A terméket kromatográfiai úton különítjük el. 24. példa: Glícil-leucil-valil-a-naiftiliamin .előállítása 2,0 millimól a-naftilamdn 30 ml ecetsavas nátriumaoetát-pufferrel készített elegyét (pH — = 4,6) 5 'C0 -ira ihűtjiük le, és gyops keverés közben 2,03 millimól N-karboxi-valil-anhidridet adunk hozzá. A reaikciióelegyet 20 percen át nitrogénnel öblítjük, miután a képződött valil-a-na!ft: ila:min-karbamát spontán dékarboxileződött. A pH-t vizes nátriumhidroxid oldat hozzáadásával 10-re állítjuk be, majd 2,3 millimól N-karboxil-leucin-aríihidridet aduink hozzá gyors keverés köziben, 2 C° hőmérsékleten. Ezután a pH-t kénsav hozzáadásával 3-ra állítjuk be, és így elősegítjük a dekaríboxileződést, majd a reákcióelegyet '15 percen át nitrogénnel öblítjük. Ezután a pH-t nátriuimihidroxididal 9,5-re állítjuk .be, és gyors keverés közben 3 Co H0ín 2,9 milliimól N-karboxi-gliicin-anihi'dridet adunk hozzá. Ezután a pH-t tömény kénsavval 3-ra csökkentjük, és az elegyen 20 percen át nitrogént vezetünk át. A terméket kromatográfiai i útoin különítjük el szilikagél-oszlopon. 25. példa: Femlalanil-glicil-glieil-leuein előállítása 2 millimól leuein 20 ml vizes káliumborát-pufferrel i(pH = 10) készített elegyéhez 25 C°on hozzáadunk gyors keverés közben 2,05 millimól szilárd N-tiokanboxi-g,liicin-anh;idridet. A reakciót egy percen át folytatjuk, és a pH-t tömény kénsavval 5-re állítjuk be, a detiokanboxilezés lefolytatása céljából, miközben kb. 10 percen át nitriogénáramot vezetünk át az elegyen. Az így kapott glicil-leucint nem különítjük el. Az eljárást 10-es pH mellett megismételjük 10 perc reakcióidő mellett, 2,02 millimól N-tiokarboxi-glicin-anhidrid felhasználásával. Az így kapott glicil-glicil-leucint nem különítjük el. 7415 44 A reakcióelegy pH-ját tömény káliumhidroxid oldat hozzáadásával 9,5-re állítjuk be, és 25 C°-on, gyors keverés köziben 2,1 millimól N-tiokaitiaxi-tfanilalamn-anhidrAdet adunk (hozzá. 30 5 perc eltelte után a pH-t 4-re állítjuk be, miközben nitrogénáramot vezetünk át az elegyen. A kívánt tetrapeptidet ammóniumszulfátós kisózással különítjük el. 10 Ha az N-tiokar;boxi-fenilalaniin-arJhidriidet a megfelelő ainhidriddel helyettesítjük, és az előző eljárást megismételjük, az alábbi vegyületeket nyerj ük: 15 valil-glicil-glicil-leucin; izoleucil-iglicil-glicil-lieucin; alanii-glicil-gliicil-leucin. 20 26. példa: .Tirozil-leucil-fenilalanin előállítása 3 millimól fenilalanin 30 ml vizes káiium-25 borát-pufferrel készített, 10-es pH-jú elegyéhez gyors keverés közben 3,2 millimól szilárd N-tiolkarboxi-laucin-anhidridet adunk. A hőmérsékletet 40 C°-ra növeljük, és 10 percen át ezen az értéken tartjuk. Ezután a reakeióele-30 gyet lehűtjük, és a pH-t tömény kénsavval •0 C°-ra állítjuk be, miközben nitrogén-áramot bocsátunk át a keveréken. A termék leucil-jfanilalanin, amelyet nem különítünk el. 35 A reakcióelegy pH-ját tömény káliumhidroxid oldat hozzáadásával 10,0-ra állítjuk be, majd gyors keverés közben 3,4 millimól tetrahidropiranil-tirozin-iN-tiiokiarboxi-anihidridet adunk hozzá. A hőmérsékletet közelítőleg 25 40 C°-j on tartjuk. A reakciót 20 percen át folytatjuk, és a detiokarboxilezest úgy folytatjuk le, hogy a pH-t kénsavvá! 3-ra állítjuk be. A reákcióelegyet egy órán át állni hagyjuk, hogy a védőcsoport lehasadjon. A kívánt terméket kro-45 matogräifiai útoin különítjük el, szilikagél oszlopon. Ugyanezt a vegyületet állítjuk elő olyan módon, hogy a fenti eljárást megismételjük etoxi-50 etil-tirozin-N-karboxi-anhidriddel. 27. példa: 55 Valil-leueil-alanil-eisztein előállítása 2 millimól cisztin 30 ml káliumiborát-pufferrel készített, 10-es pH-jú elegyét !kb. 10 C°-on tartjuk, miközben gyoirs keverés mellett 4,1 60 millimól N-tiokar!boxi-alanin^an,hidiridet adunk hozzá. A reakciót 15 percen át folytatjuk, és a pH-t híg sósav oldattal 2 C°-on 3-íra állítjuk be, miközben nitrogén-áramot vezetünk át az elegyen. A termékként nyert bisz-(alanil)-cisztint 65 nem különítjük el. 22
