157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére

157415 45 46 A reakcióelegy pH-j|át 10,2-nre állítjuk be, majd a hőmérsékletiét 0 C°-ig csökkentjük, és gyors keverés köziben 4,2 millimól N-tiokarboxi-leucin-aníhidridet adunk hozzá. A reakciót egy órán át folytatjuk, és a detiakarboxilezést úgy folytatjuk le, hogy a pH-t 3,5-re állítjuk be, miközben nitrogén-áramot vezetünk át az elegyen. A közbenső termékként kapott bisz-(leueil-alanilj-eisztint nem különítjük el, hanem gyors keverés közben, 25 C°-on 4,3 millimól N-tiakarboxi-valin-aribidriddel kezeljük. A detiakaiiboxilezést 3-as pH-n kénsavval végezzük, így bisz^(valil-leueu-alaml)-,cisztin képződik, amelyet kisózunk a reakcióelegyből. A terméket hidrogénszulfiddel redukáljuk valil-leucil-alanil-eiszteinné. 28. példa: Lizil-glicil-glicil-leucin-acetát előállítása A 25. példában leírt módon glieil-glicil-leucint állítunk elő, és az ezt a vegyületet tartalmazó reakcióelegyet 0 C°-on, gyors keverés közben két órán át kezeljiük 2,5 millirnól szilárd f-!karlboibeinzioxi-N-tiobariboxi-lizinaníhidriddel. A de'tiokarlboxilezést kénsavval végezzük nitrogén jelenlétében, 4^es pH mellett. Az íHkanbO'benzoxi-lizil-glicil-glicil-leucint kisózzük az elegybql, majd szűréssel nyerjük ki. A karibabenzoxi-csqportot hidrogénezéssel távolítjuk el, és a terméket úgy különítjük el, hogy az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, miután a Raney-nikkel katalizátort leszűrtük. 29. példa: Glicil-fenilalanil-leucin előállítása 2 millimól feinilalanil-leucin 10 millimól 0,45 mólos bórsav-puff érrel készített elegyének pH-ját 4 C° hőmérsékleten 9,5-re állítjuk be 50%os nátriumhidroxid oldat hozzáadásával, nitrogén-atmoszféra alatt. A kevert reakcióelegyhez 2,1 millimól N-tiokarboxi-gliein-anhidridet adunk, miközben a pH-t 50%-os* nátriumhidroxid oldat hozzáadásával 9,5-ön tartjuk. Miután a reakcióelegyet 10 percen át kb. 4 C°-on kevertük, az elegyet szűrjük, és a pH-t 50%-os kénsav oldattal 5,5-re állítjuk be, miközben nitrogént buborékoltatunk át az elegyen. A kívánt termék glicil-fenilalanil-leucin, amelyet szűréssel nyerünk ki. 30. példa: Glicil-prolil-fenilalanil-arginin előállítása Összesen 2,0 millimól arginin-faidrokloridot felveszünk 200 ml káliuimborat-pufferben. A pH-t 3,0 értékre csökkentjük, miközlben nitrogént buborékoltatunk át az elegyen, hogy kiűzzük a széndioxidot. Ezután vizes káliumhidroxid oldat hozzáadásával a pH-t 10,5-re állítjuk be. A reakcióelegy hőmérsékletét 0 C%ra csökkentjük, majd 25 g jeget és ezt követően 3,8i2 g N-tiokarboxi-íenilalanin-anhidridet adunk az elegyhez. A reakcióelegyet kaverőben 2 órán át gyorsan keiverjük. A pH-t kénsavval 3-ra állítjuk be, hogy lefolytassuk a detiokarboxilezést. , Ezután a pH-t 10-re növeljük káliumhidroxid hozzáadásával, majd az eljárást 25 C°-on 30 perc reakcióidő alatt megismételjük 2,02 millimól N-tidkarboxi-íprolin-anhidriddel. A pH-t dekarboxilezés céljaiból kénsavval 3,0-ra állítjuk be. Az eljárást 2,02 (millimól N-tidkarboxi-glicm-anlhidríddel megismételjük 20 C°-on, majd 15 percen át folytatjuk a reakciót; a kezdeti pH-értiék 9,5. A pH-t kénsatvval 7-re állítjuk be, és a reakcióelegyet közelítőleg 16 órán át állni hagyjuk, a detiokarboxilezés lefolytatása végett. A reaikcióelegyet összesen 10 liter térfogatra hígítjuk, és 18 óra alatt 800 ml IRC—50 gyantát tartalmazó oszlopon vezetjük át. Az oszlopot 4 liter vízzel mossuk, 15 milliliter/perc áramlási sebességgel. Az oszlopot 0,35 n kénsav oldattal eluáljuk, és az eluátumot 3O0 ml-es frakcióidban gyűjtjük össze. A pozitív niníhidirin-próbát adó frakciókat fagyasztva szárítjuk, a szilárd részeket egyesítjük és mindaddig extraháljuk metanollal, amíg az extraíktumok már nem adnak pozitív ninhidrin-próbát. A pozitív ninhidrin-ipróbát adó extraktumokat egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot minimális mennyiségű híg kénsavval 4,5-ös pH-n felvesszük, és 5 térfogat metanol, majd 10 térfogat etanol hozzáadásával csapadékot képzünk. A csapadékot szűréssel kinyerjük, víziben oldjuk, majd azonos mennyiségű metanollal és etanollal ismét kicsapjuk. A kicsapódott termék glicil-prolil-fenilalanil-arginin, amelyet elkülönítünk, majd metanollal és éterrel mosunk. 10 15 20 25 30 S5 40 45 50 55 60 40 millimól leucin 400 ml 0,45 mólos bórsav- 45 -puíferirel készített oldatának pH-ját 50%-os nátriumhidroxid oldattal keverőben 10,5-re állítjuk be 2 C°-on, nitrogén-atmoszféra alatt. A kevert oldathoz gyorsan hozzáadunk 35 millimól N-ikarboxiifenilalariin-anhidridet, miközben 50 a pH-t 50%-os nátriumhidroxid oldat hozzáadásával 10,5-ös értéken tartjuk. A reakcióelegyet szűrjük, és a színtelen szűredéket 50%ois kénsav oldattal 6,4-es pH-ig visszasavanyítjuk, miközlben nitrogént buborékoltatunk át az 55 oldaton. A termékként nyert fenilalanil-leucin kicsapódik, és kinyerése szűréssel történik.