157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
41 157415 42 tyánkősavimid-észterét adjuk 3 ml etanolból oldva. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten tartjuk éjjelen át. A pH-t sósavval 2-es értékre állítjuk be, majd az etanolt vákuumban eltávolítjuk, .aminek hatására olaj különül el. Az olajat elválasztjuk a vizes rétegtől, etilacetátban oldjuk, vízzel mossuk, magnéziumszulfát fölött szárítjuk, majd szárazra pároljuk. Ilyen módon 565 mg karbobeinzoxi-oktapeptidet kapunk. 485 mg (0,462 millimól) karbobenzoxi-oktapeptidet 10 ml jégecetben oldunk, és 50.0 mg 10% palládiumot tartalmazó csontszánkatalizátart adunk Ihozzá. A vegyületet ,40 font nyomáson hidrogénezzük 7 órán át. A katalizátort eltávolítjuk, és az oldatot olajjá töményítjük. Vékonyréteg-kromatográfia azt mutatja, hogy a termeik még' mindig a védett peptid. Az olajat ismét feloldjuk 30 ml jégecetben, majd ismét hozzáadunk 500 mg 10% palládiumot tartalmazó csontszenet. A reakcióelegyet azután éjjelen át hidrogénezzük 40 font nyomással. A katalizátort eltávolítjuk, és a reakcióelegyet szárazra pároljuk. Ilyen módon 167 mg védetlen proliliprolil^glicil-ifenilalanil-szeril-protu-fenilalanil-arginint kapunk. 48 mg oktapeptidet oldunk 1,8 ml 10-es pH-jú pufferten., és a pH-t 0 Cq^on 9,5-;re állítjuk be. Ehhez az oldathoz dimetilfarmamidban 0,3 ml N-karboxi-argininaníhidridet adunk. Az NCA hozzáadott mennyisége 100% feleslegnek felel meg. Egy percen át tartó keverés után a pH-t 6,3jra állítjuk be, és a reakcióelegyet fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva-szárított szilárd anyagot metanollal extraháljuk, és a metanolos oldatot Amberlite IRC 50 gyantaoszlopra viszszük, majd a kívánt nonapéptidet 25—90%-os vizes ecetsav oldattal eluáljiuk. A 13—15. frakciókat fagyasztva szárítjuk. így 17,9 mg bradikinint különítünk el, amelyet 7 ml metanolban oldunk. Az oldhatatlan részeket centrifugálással elkülönítjük. Az oldatot szobahőmérsékleten kis térfogatra betöményítjük, és centrifugálással amorf szilárd anyagot különítünk el, amelyét éterrel mosunk és rvákuumban szárítunk. Spinco-féle aiminosavHanalízis megerősítette a bradikinin-szerkezét fennforgását. 20. példa: Fenilalainil-glicil-leucil-tvalil-glicin előállítása 2,0,2 millimól fenilalandnHN-karboxianhidrid és 2 millimól gliiciWeucil-valil-gliicin száraz keverékét egyetlen részletben hozzáadjuk 20 ml vizes fcáliumborát pufferhez (pH = 9) gyors keverés közben, 0 C° hőmérsékleten. Az elegyet 45 másodpercen át keverjük, és a pH-t tömény kénsavval 0 C°-on 4~es értékre állítjuk he, miközben kb. 10 percen át nitrogén-áramot vezetünk keresztül a reafceióelegyen. A terméket fagyasztva-szárítássai nyerjük ki majd a maradékot metanollal extraháljük. A metanolos oldatot 4 : 1 : 5 arányú n-butanol-ecetsavnvíz rendszerrel hívjuk elő. 21. példa: Tirozil-leueil-(D)--íenilalanin előállítása 3 millimól D-fenilalanih 30 ml vizes káliumborát pufferrel és 5 g jéggel készített keverékét 10,5-ös pH-n 3 C°-ra hűtjük, és gyors keverés közben 3,2 millimól szilárd N-karboxi-leucinarahidridet adunk hozzá. A reakciót 30 másodpercen át folytatjuk, és a pH-t tömény kénsavval 0 C°-on 3-ra állítjuk be, miközben nitrogén-áramot vezetünk át a reakcióelegyen. A termékként nyert leucil-íenilalanint nem különítjük el. A reakcióelegy pH-ját tömény káliumhidroxid oldat hozzáadásával 10,0-ra állítjuk be, és 'gyors keverés mellett 3,4 millimól tetraíhidropiranil-tirozin-JNÍ-karboxianlhidridet adunk hozzá, miközben a hőmérsékletet közelítőleg 0 Cq-on tartjuk. A reakciót egy percen át folytatjuk, és a defcariboxilezést lefolytatjük olyan módon, hogy a pH-t kénsavval 3-ra állítjuk be. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, majd egy órán át ezen a hőfokon tartjuk a védőcsoport eltávolítása végett. A kívánt termieket kromatográfiai úton különítjük el sziliikagél-^oszlopon. 22. példa: />-(3,4-Dihidroxifenil)-L-alaml-Hfenilalanil-glicil-leucil-valil-iglicin előállítása A 21. példa termékét (2,02 millimól) felveszszük 30 ml 10-es pH-jú káliumíborát-pufferben. Az oldatot 0 C°-ra lehűtjük, és gyors keverés köziben 3 imillimól di-tetrahidropiranil-DOPA-étert (N-kariboxi-/5-i(2,4^d!Íhidroxifei nil)-L-alanin-di-tetralhidrqpiranil^éter) adunk hozzá. A reakciót egy percen át folytatjuk, és a pH-t tömény kénsavvá! 4-re állítjuk ibe, miközben nitrogénáramot vezetünk át az elegyen. A nitrogén átvezetését 20 percen át folytatjuk. Ezután a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, majd egy órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. A terméket kromatográfiai úton különítjük el. 23. példa: Izoleueil-valil-glieil-epinefrin előállítása 3 millimól epinefrin és 5 g jeget tartalmazó 30 ml vizes káiiumiborát-jpuffer keverékét (pH= =10) 0 C°-ra hűtjük,, és gyors keverés közben 3,01 millimól N-karboxi-glicinanlhidíridet adunk hozzá. A reakciót 40 másodpercen át folytatjuk, 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 21
