157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
157415 31 32 A reakcióelégyet 1 percen át gyorsan keverjük, majd a pH^t defearboxilezés céljából 3-ra állítjuk be. Ezután a pH-t káliumihidroxiddal 11-re növeljük, és az eljárást 19,5 millimól N-karboxi-glicinanhidriddel megismételjük. A glicil-glicil-Hg'liicint tartalmazó, 11-es pH-jú oldathoz 22 millimól S-benzil-N-karboxi-ciszteinanhidridet és 50 g jeget adunk, és az elegyet 1 percen át keverjük. A végső pH 10,2. Kénsavval a pH-t 5,5-re állítjuik be, és az ölegyet 100 ml térfogatú szónoszlopon vezetjük keresztül. A kolonnát 200 ml vízzel, majd 800 ml 5%-os ecetsavval mossuk. Az eluálást 5%os ecetsavval végezzük 50%-os acetonban. Az eluáltumot vákuumíban bepároljuk, és így maradékiként a kívánt terméket nyerjük, amelyet aceton és víz elegyéből átkristályosítunk. 13. példa: Alanil-alanil-alanil-alanil-glicin előállítása 80 millimól glicin 4 liter nátriumborát pufferrel készített, 10-es pH-jú oldatához 0 C°-on 80 millimól N-karboxialaninanhidridet adunk gyors keverés közben. Két perc eltelte után a pH-t deíkarboxilezés céljából 3-ra csökkentjük, miközben nitrogénáramot vezetünk át az elegyen. A pH-t 50%o-os vizes hátriumhidroxid-oldattal 10-re növeljük, és a fenti reakciót megismételjük. Az eljárást kétszer megismételjük. A végső dekarboxilezés alkalmával 3nas pH mellett csapadék képződik, amelyet ll-«s pH mellett vizes nátriumhidroxid-oldatban feloldunk, majd a pH-t 5,5-re csökkentjük. A vegyület azonosságát elemi analízissel és Spinoo-iféle aminosav-lhidrolízissel állapítjuk meg. 14. példa: Birka-dikortikotropin szintézise A birka-d^kortikotropin szerkezetét az alábbi séma mutatja: ACTH SER TYR SER MET GLU HIS PHE ARG A TRY GLY LYS PRO VAL GLY LYS LYS ARG ARG B PRO VAL 5 LYS VAL TYR .PRO ALA 15 GLY GLU 10 20 40 45 50 55 ASP ASP GLU ALA SER GLN ALA PHE PRO LEU GLU PHE D Ezt az anyagot az előző példák szerinti el-25 járásokkal állítjuk elő, az alábbi. 1., 2., 3. és 4. táblázatokban definiált reaikcióMtételek mellett; e táblázatok a fentebb bemutatott különböző szegmensek előállítását mutatják. 30 i5 A szintézis első lépésében az N-Jkarboxi-tirozinan'hidrid tetrahidropiranil-eteret az 1. táblázat 1. lépésében jelzett feltételek mellett szer kihez kapcsoljuk. A szekvenciát a táblázatokban jelzett módon folytatjuk. 1. táblázat Az A-jelű peptid előállítása A Reak-Félhasz _ Alkal-Delépés ció- * Tn §it" mázott Kapcso- Idő • sor- félté- NCA felesleg lási pH perc lezési száma telek % tí H 1 I TYR* 5 10,0 2 3 2 I SER* 25 10,2 2 3 3 I MET 10 9,8 3 3 HIS* 10 9,8 5 I PHE 10 10,6 1 3 6 I ARG 30 10,2 2 3 60 A terméket, amelyben a hisztidin im-benzilszármazékként van védve, IRC 50 gyanta felhasználásával különítjük el. A 2. táblázat az A-peptidnek A—B peptiddé w\ való átalakítási feltételeit adja meg. i:
