156802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofulvin antibiotikum előállítására
156802 10 2. táb] [ázat Antibiotikum Péld a Mikroorganizmus gázolajból nyert mg vizes fázisból nyert mg 7 P. griseofulvum 384 8 P'. griseofulvum 768 256 9 P. griseofulvum 1088 — 10 P. pátulum 768 160 11 P. patulum 1680 — mékét. Centrifugálás után külön kinyertük a következő frakciókat: 12. példa A következő összetételű, sókat tartalmazó vizes közeget (10 liter), bevittünk egy 15 literes, keverővel ellátott fermentorba: súlyrész trinátriumfoszfát 3,4 , káliumklorid 0,6 magnéziumszulfát 0,3 ammóniúmszulfát 2,5 nyomelemeket tartalmazó lágy vízzel kiegészítve 1000 súlyrészre. A fermentorba adtunk néhány mg/liter élesztőkivonatot, majd 50 g Candida tropicalist 20 súly% szárazanyagot tartalmazó vizes pép alakjában, és ezután 150 g 20 súly% normál paraffin-szénhidrogént tartalmazó ásványolaj eredetű nehézgázolajat. A tenyészet hőmérsékletét 30 + 1 C°-on tartottuk, a pH 4 volt, a szellőzést és keverést úgy szabályoztuk, hogy a közeg minden literére percenként 3 mmól oxigén jutott. Automatikus pH-szabályozóval ammóniaoldatot bocsátottunk be. Amikor a sejttartalom elérte a 4 g/litert, a fermentort folytonos üzemben kezdtük használni órárikénlt 0,1 tf/tf hílgítási ütemmel. Köziben a fermentor nehézgázolaj tartalmát 120 g/literre növeltük. A fermentlevet folytonosan lebocsátottuk a fermentorból és 120 g/litert dekantáltunk, 65% elhasznált közeget kivonva és 65% vízvezetéki vízzel pótolva. Az elhasznált közeghez, amelyet kivontunk, 2 g/liter nátriumnitrátot, 4 g/liter káliumdihidrogénfoszfátot, 1 g/liter káliumkloridot és 150 g/liter gazolajat adtunk, és a keverék 1 literéhez az 1. példában leírt módon kukoricalekvár-glukóz közegben tenyésztett Penicillium griseofulvum törzsből álló oltóanyagot adtunk; majd a keveréket szellőztetés közben 4 napig kevertük. Az elválasztott gázolaj 2 g/liter antibiotikumot tartalmazott. Élesztőterméket is kaptunk a következő módon: 65% elhasznált közeg eltávolítása és vízvezetéki vízzel való pótlása után kapott felső fázishoz hozzáadtunk 0,5 g/líter „NI 29" néven.: forgalomban levő nem-ionos detergenst, laurilalkohol és etilénoxid 1:8,75 mólarányú kondenzációs tereihasznált szervetlen közeg Asszimilálatlan gázolaj Mikroorganizmus-pép g/liter 839 112 49 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Ezt a mikroorganizmus-pépet azután szobahőmérséleten vizel mostuk és centrifugáltuk, a kapott élesztő ekkor 65—70% vizet tartalmazott. A vizet részben eltávolítva 50% száraz élesztőből és 50% vízből álló élesztőpépet kaptunk. Ezt a nedves élesztőt ezután extraktorba szivattyúztuk; az extraktor vízszintes tengelye körül forgó szűrődob volt. 50% hexánból és 50% izopropanolból álló oldószerelegyet adtunk a nedves élesztőhöz 8 rész elegy: 1 rész száraz élesztő arányban, és az élesztőből, vízből és oldószerből álló keveréket 30 percig 50 C°-on tartottuk. Ezután az élesztő szennyezéseinek zömét tartalmazó oldószert leszívattuk. A visszamaradt nedves élesztőterméket egy második extraháló műveletnek 1 rész száraz élesztőre 1 rész vízből és 4 rész 50% hexán és 50% izopropanol tartalmú elegyből álló oldószerrel 50 C°-on 30 percig kezeltük. A szennyezéseket tartalmazó kivonat leszűrése után a visszamaradt terméket 2 rész 80% n-hexánból és 20% izopropanolból álló oldószereleggyel extraháltuk. A keveréket 10 percig 50 C°-on tartottuk, és az oldószert leszívattuk, a végén vákuum alatt. Ezt az oldószert még négyszer használtuk a keverék mosására. Végül az élesztőterméket túlhevített vízgőzzel megszárítottuk. A 3. táblázatban közöljük az élesztő nitrogén és zsírtartalmát az oldószeres extrakció előtt és után. 3. táblázat élesztő az oldóvégső szeres élesztőextrahálás termék előtt nitrogén, a száraz élesztő súly%-a 9,5 11,0 összes lipid, a száraz élesztő súly%pa . 13,8 0,2 Az így kapott élesztőtermék, amely szennye-55 ződésektől mentes, felhasználható takarmányként. Az előző példákban használt gázolaj jellemzői a következők: 60 fajsúly 16 C°-on 0,8698 n2 o D 1,4835 aaivarosodási pont + 106 C° dermedési pont + 15 C° kéntartalom 1,67 súly% 6Í5 normál paraffinszénhidrogén 14,7 súly%
