156802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofulvin antibiotikum előállítására
11 156802 12 13. példa Keverővel ellátott 60 literes fermentorba betöltöttünk 40 liter következő összetételű vizes szervetlen táptalajt: dikáliumhidrogénfoszfát '1 súlyrész káliumdihidrogénfoszfát 0,5 súlyrész magnéziumszulfát — 7 H2 0 0,5 súlyrész nátríumklorid 0,1 súlyrész vas(II)szulfát — 7 H2O 0,02 súlyrész élesztőkivonat 0,03 súlyrész lágy vízzel kiegészítve 1000 ml-re Ezt a vizes táptalajt beoltottuk Pseudomonas aeruginosa baktérium C7—C20 normál szénhidrogéneket tartalmazó tápanyagon való 24 órai tenyésztésével készült kb. 1 g/liter száraz sejtsűrűségű tenyészetével. A tenyészet hőmérsékletét 36 + 1 C°-on, a pH-ját 7-en tartottuk, a levegőzés és keverés körülményeit úgy szabályoztuk, hogy percenként 4 mmól oxigén jutott minden liter közegre. Automatikus pH-szabályozóval vezérelt ammónia-adagolással tartottuk a pH-t állandó értéken. . A tenyészethez 180 g/liter ütemben 0,870 g/cm3 sűrűségű, +15 C° cseppenéspontú és 250—395 C° forrástartományú gázolajat adagoltunk. Amikor a sejtsűrűség elérte a 12 g/litert, a fermentor működése állandósult 0,2 tf/tf/óra hígítási ütemmel. A fermentlevet folytonos ütemben vontuk ki a fei mentorból, és óránként 12 litert dekantáltunk; 65% elhasznált közeget kivontunk;, és '65i% csapvízzel pótoltunk: A kivont elhasznált közeghez hozzáadtunk 2 g/liter nátriumnitrátot, 4 g/liter káliumdihidrogénfoszfátot, 1 g/liter káliumkloridot és 150 g/liter gázolajat, és minden liter ilyen keveréket beoltottunk a 2. példában leírt módon kukoricalekvárt és glukózt tartalmazó szubsztrátumon készült Penicillium griseofulvum tenyészettel, majd a keveréket 4 napig levegőztettük, és kevertük. A dekantálással elkülönített gázolaj literenként 2 g antibiotikumot tartalmazott. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás grizeofulvin antibiotikum termelésére azzal jellemezve, hogy egy Penicillium nembe tartozó penészfaj grizeofulvint termelő törzsét aerób viszonyok között, szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó vizes táptalaj és szénhidrogén szubsztrátum jelenlétében tenyésztjük, majd — adott esetiben a tenyészet termeikéhez szénhidrogént hozzáadva — az antibiotikumot tartalmazú szénhidrogént elkülönítjük. (Elsőbbsége 1966. november 25.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy első lépésként egy Penicillium nembe tartozó penészfaj grizeofulvint termelő törzsét aerób körülmények között vizes táptalaj és szénhidrogént és egy nemszénhidrogén vegyületet tartalmazó szubsztrátum jelenlétében tenyésztjük, majd második lé-5 pésként egy Penicillium nembe tartozó penészfaj grizeofulvint termelő törzsét aerób körülmények között vizes táptalaj és szénhidrogén szubsztrátum jelenlétében tenyésztjük, végül — adott esetiben a tenyészet termékéhez gzénibid-10 rogént hozzáadva — <az .antibiotikumot tartalmazó szénhidrogént elkülönítjük. (Elsőbbsége: 1966. november 25.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosí-15 tási módja azzal jellemezve, hogy az első lépésben a szén és a nitrogén aránya kisebb, mint 20:1. (Elsőbbsége: 1966. november 25.) 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosí-, 20 tási módja azzal jellemezve, hogy a második lépésben a szén és a nitrogén aránya legalább .80:1. (Elsőbbsége: 1966. november 25.) 5. Eljárás grizeofulvin antibiotikum termelé-25 sere azzal jellemezve, hogy első lépésként aerób körülmények között tenyésztünk egy olyan mikroorganizmust — a továbbiakban „első lépési mikroorganizmus" — amely egy szénhidrogénén •— a továbbiakban „első lépési szénhidrogén" — 30 fejlődésképes, amikor is ezt a tenyésztést az első lépési szénhidrogén, adott esetben a mikroorganizmus számára asszimilálhatatlan egyéb szénhidrogének és vizes táptalaj jelenlétében végezzük, majd a használt vizes táptalaj zömét elválasztjuk a mikroorganizmustól; ezután a használt vizes táptalajt vagy annak egy részét egy szénhidrogénnel együtt — a továbbiakban „második lépési szénhidrogén" — átvisszük egy második lépésbe, amelyben egy Penicillium nembe tartozó penészfaj grizeofulvint termelő törzsét egy részben vagy egészen szénhidrogénekből álló vagy részben vagy egészen nem-szénhidrogén szerves vegyületekből álló szubsztrátum jelenlétében tenyésztjük, majd adott esetben a tenyészet termékéhez szénhidrogént adunk, és az anti-45 biotikumot tartalmazó szénhidrogént elkülönítjük, amikor is második lépési szénhidrogénként részben vagy egészen az első lépésben nem aszszimilálódott szénhidrogént vagy részben vagy egészen hozzáadott szénhidrogént használunk. 50 (Elsőbbsége: 1967. november 24.) 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatósítási módja azzal jellemezve, hogy az első lépési mikroorganizmus élesztő. (Elsőbbsége: 1967. no-55 vember 24.) 7. A 6. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az élesztő a Candida nembe tartozik. (Elsőbbsége: 1967. no-60 vember 24.) 8. A 7. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az élesztő a Candida tropicalis törzse. (Elsőbbsége: 1967. no-65 vember 24.) 35 40
