156386. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polimixin kinyerésére és tisztítására
5 nagymértékben tisztított, tehát semlegesítés és oxálsavas kezelés, majd a pH-nak 6,4nre való beállítása után kb. 1/7 résznyi, kis szemcseméretű gyengén savas karboxil-típusú kationcseréiő gyantán erősen koncentrálható. E koncentrálás hatásfoka tovább javítható, ha a metanol részarányát az eluátumban vizes hígítással vagy bepárlással csökkentjük. A második gyantás kezelésihez használt gyantaoszlopot is átáramoltatjuk egy kevés butanol^ecetsav^piridin-víz vagy izobutanol-hangyasav-«kollidin-víz oldószerelegygyel, majd ásványi savas alkohollal újra leoldjuk az antibiotikumot, az eluátum pH-ját kb. 4 és 5 közé állítjuk «és csökkentett nyomáson 1/3 térfogatra bepárolva a metanolt teljesen eltávolítjuk. A koncentrált oldatot nátriuimaicetáttal vagy nátriumnitráttal telítjük és az oldatból ammóniagáz bevezetésével kicsapjuk a poli nixiin bázist. A csapadékot alacsony hőmérsékleten vákuumban kiszárítjuk, majd az elporított bázist kevés 50 C°-os vízzel scimentesre mossuk, híg ásványi savval sztöichioirnetrikus arányban feloldjuk, kevés aktívszénnel derítjük, szűrjük és liofilizáljuk, vagy az oldatból isimért módon, szerves oldószerrel történő elegyítéssel kicsapjuk a polimixin szulfátot. A kapott termék vesetoxicitási vizsgálatok alapján gyógyászati alkalmazásra megfelelő tisztaságú. A találmány számos előnnyel rendelkezik. . Mindenekelőtt egyszerű és kényelmes tisztítási eszközökkel és jó hatásfokkal biztosítja az antibiotikum kíméletes kinyerését, kikerüli a sokszor komoly .akadályokat jelentő ,,élesreszűrést", mert teljesen kielégítő eredményt biztosít icsak a mechanikus szennyeződések eltávolításával is. Feleslegessé teszi a vizes oldatok hosszadalmas és veszteséges bepárlását. A szennyezések eltávolítására használt oldószerelegy olcsó, legnagyobb része víz. A vízben igen jól oldódó alkáli- vagy aimmóniumsók alkalmazása egyrészt jelentősen megjavítja a polimixin kicsapását, másrészt e sók nagy oldékoinysága teljesen leegyszerűsíti a sótalanítási műveletet. Az említett gyanta mechanikai tulajdonságai jók. A keverés miatti aprózódás nem jelentős, egy feldolgozás után max. 2%-a vész el. Ugyanaz a gyantatömeg húsz feldolgozás elvégzése után is kielégítő adszorpciós kapacitással rendelkezik. Megfelelő előszűrés alkalmazásával az elszennyeződés el- 5Q hanyagolható mérvű. A találmány szerinti eljárás foganatosításaira az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa: Üvegcsőbe töltött 200 g, kereskedelmi csomagolásnál szokásos víztartalmú Wafatit CP—300-as katiomcserélő gyantán (a kiszárított gyanta szemcsemserete: d=0,l—0,4 ram) 500 ml 1 n sósavat áramoltatunk keresztül. A felesleges savat ionmentes vízzel kimossuk, majd 800 ml 1 n NaOH-val átmosva a gyantát sóíormálba hozzuk, és ismét vízzel mossuk, míg a lecsepegő folyadék pH-ja 10 és 12 között nem lesz. 6 3 1 polimixin tartalmú fermentlevet (2520 E/ml) kristályos oxálsavval pH 2,,5-ig savanyítunk, 332 Gl/a jelű jénai merülő szűrőgyertyán vagy egyéb erre alkalmas szűrőfelületen vá, kuumátszívással a mechanikus szennyeződéseket eltávolítjuk, majd 10 n NaOH-val pH-ját 6,4-re állítjuk be. (Nagyobb mennyiségek átsziválásánál a 304 Gl/a, ill. a 305 Gl/a jelű szűrőgyertyát javasoljuk a mechanikus szennyeződések 0 eltávolítására.) Ebben a baktériumsej tekét is tartalmazó folyadékban 150 ml frissen regenerált, vízzel duzzasztott Wofatit CP—300 (nátrium alak) kationicsarélő gyantát szuszpendálunk, és 1 órán keresztül állandó mozgásban 5 tartjuk. 1 óra eltérőével ugyanazon a szűrőfelületen átszívatjuk a kiextra'hált fermentlevet, a visszamaradt gyantát összegyűjtjük, vízzel többször átmossuk, majd 3 cm átmérőjű üvegcsőbe töltjük. Az így kialakított oszlopon 650 ml bu-20 tanol-ecetsavipiridin-víz oldőszarelegyet áramoltatunk át 6 ml/perc sebességgel, majd 500 ml sósav-metanol eleggyel (2 n HCl és metanol 1:1 térfogat-arányban) leoldjuk az adszorbeálódott antibiotikumot 5 ml/perc sebességgel. A felhasz-25 náit oldószerelegy összetétele: 87,9 ml butanol, 62,1 ml jégeicet, 71 ,'1 ml piridin, 780 ml víz; alapos összerázás után 1 napig állni hagyjuk, és az esetleg megjelenő vékony felső fázisréteg eltávolítása után a tiszta alsó részt használjuk 30 fel. Az eluátumot 10 n NaOH-val haladéktalanul kb. pH 7-ig semlegesítjük, vízzel térfogatát kétszeresére hígítjuk, majd kristályos oxálsavval pH 2,5-ig savanyítjuk. Az oldat pH-ját 10 n NaOH-val ismét 6,4^re állítjuk be. Ezt az oldatot vezetjük keresztül 1,5 ml/perc sebességgel 1,8 cm átmérőjű csőbe töltött 22 ml vízzel duzzasztott Wofatit CP—300-nas ioncserélő gyantából készült oszlopon. (A kiiszárított gyanta szemcsemérete: d = 0,1—0,2 mm, nátrium alak). Az oszlopom 100 ml butanol^eoetsavjpiridinvíz oldószerelegyet vezetünk keresztül (1,5 ml/ perc), majd sósav-metanol eleggyel (37%-os HCl : víz : metanol = 0,3 : 0,7 : 2) ismét oldjuk az adszorbeálódott antibiotikumot (1 ml/perc). Az eluátuni első 6 ml-ét elkülönítjük, majd a következő 75—180 ml-es frakciót fogjuk fel. Az eluátum pH-ját 10 n NaOH-val késedelem nélkül 4,5 (±0,í2)-re állítjuk, és csökkentett nyomáson 60 C°-on 1/3-ára bepárőljuk. A bepárolt oldathoz szükség esetén annyi vizet adunk, hogy az oldat ismét átlátszó legyen. Ezt a koncentrátuim-ot finoman eliporitatt GH3COONa-55 -iSHaOnval telítjük, majd jeges hűtés mellett állandó mozgatás közben kb. 2 percen át erős áramban NH3 gázt vezetünk keresztül a rendszeren. A kivált csapadékot szűrjük, 3 x 20 ml 0 C°-os vízzel lassú áramban átmossuk, csök-60 kentett nyomáson 60 C°^on kiszárítjuk. A kiszárított bázist összegyűjtve elporítjuk, mérjük, 400 mgjonként szűrőpapírral fedett kis üvegszűrőbe (G3) rakjuk és kétszer 2—2 ml 50 C°os vízzel lassú áraimban átmosva sómentesít-65 jük. A bázist a fenti módon ismét kiszárítjuk, 3
