156386. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polimixin kinyerésére és tisztítására
156386 mérjük sztödhiometrikus mennyiségű híg i(0,l—1 n) H2 S0 4 -ben oldjuk, ml-enként 2—6 mg aktívszénnel 1,5 órán át rázogatva derítjük, szűrjük 8 a kristálytiszta szűrletet liofilizáljuk. Az alábbi táblázat részletesen elemzi a feldolgozás menetét : A feldolgozás lépései ml E/ml mg E/mg Kinyert, ill. kinyerhető polimixin polimixin veszteség % Poliimixin-tartalmú fermentlé K extrahált fermentlé Butanol-ecetsav-piridin-viz elegy 1. eluátuim Kiextralhált fermentlé Butaniol-ecetsav-piridin-víz elegy 2. eluátum Vákuumban 'bepárolt polimixin oldat Kicsapott polimixin bázis 50 C°-os mosóvíz Sómemtesített bázis Polimixin B szulfát oldat derítés, szűrés után Liofilizált polimixin 2. példa: 3 1 fermentlevet vízzel térfogatának 1,5-szö- íO rösére hígítunk, kristályos oxálsavval pH 2,5-ig savanyítjuk, a mechanikus szennyezéseket kicentrifugáljuk, majd az oldat pH-ját 10 n NaOH-val 6,4-ce állítjuk. 3 cm átmérőjű üvegcsőbe 150 ml vízzel duz- 35 zasztott Wofatit CP—300 .kationcserélő gyantát töltünk (nátrium alak), majd a fenti fermentációs olyadékot 50 mi/perc sebességgel átvezetjük az oszlopon, az átvezetést megismételjük, majd az oszlopot kávés vízzel mossuk és 700 40 ml izoibutanolJhaingyasaíVHkollidin-víz eleggyel áramoltatjuk át. Az elegy összetétele: 74 ml izobutanol, 15 ml 80%-os hangyasav, 40 ml koliidin és 420 ml víz. A továbbiakban az 1. példa szerinti módon járunk el, az ioncserélő gyanta- 45 ról történő másodszori leoldásig. A kapott 75—80 ml eluátum pH-ját 10 NaOH-val 3,5 (± 0,2)-re állítjuk be, 60 C°-on csökkentett nyomáson 1/3-ára bepároljuk, és a bepárolt oldathoz szükség esetén annyi vizet adagolunk, 50 hogy az oldat ismét átlátszó legyen. Az így kapott konoentrátuimhoz icseppenként 10 n NaOH-t adunk állandó mozgatás köziben, míg az anyalug pH-ja 5 (±0,i2)^re nem emelkedik. A kivált polimixin bázist kiiszűrjük, 10 ml 0 C°-os 55 vízzel átmossuk, majd a szűrletet és a 10 ml mosói olyadékot a kicsapó 'edénybe vissza töltjük. A szűrőn maradt csapadékot további 3—>20 ml 0 C°-os vízzel mossuk, majd vákuumban 60 C°-on szárítjuk ki. 60 A szűrletet finoman elporított NaN03 -tal szobahőmérsékleten telítjük, és hűtés mellett kb. 2 percen át erős áramban NH3 gázt buborékoltatunk rajta keresztül, állandó mozgatás közben. A polimixin bázist kiszűrjük, 3 x 20 ml 0 65 3000 2530 — 3040 170 — 650 325 — 500 13.623 — 1000 325 — 100 1890 — — 75 83.664 — — 31 194.610 — — — — 1702 3420 17 14.230 — — — — 064 8360 36 136,300 — — 735 6640 3,2 100 — — 6,8 - 2,8 90,1 — — 4,3 - 2,5 83 — 79,8 — 77 — 73,4 64,9 64,5 C°-os vízzel mossuk, és vákuumban kiszárítjuk. Az egyesített polimixin csapadékot porítjuk, mérjük és 400 mg-onként szűrőpapírral fedett kis üvegszűrőibe (G3) rakjuk. 3x2 ml 50 C°-os vízzel átmosva sótalanítjuk, a sótalanítött bázist a fenti módon kiszárítjuk, mérjük és sztöabiometrikus mennyiségű hígított HjSO^ben oldjuk. Az oldathoz ml-enként 2—,6 mg aktívszenet mérünk és azzal 1,5 órán át rázogatjuk, majd szűrés után a tiszta oldatot lioifilizáljuk. Kiindultunk 3000 ml 2380 E/ml polimixin tartalmú fermentléből, végtermékként 706 mg liofilizált polimixin B szulfátot kaptunk, mely mgonként 6120 E polimixint tartalmaz, — 60,5%. 3. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy az ioncserélő gyantát centrifugálással nyerjük vissza a fermentléből, valamint az antibiotikum első és második sósav-metanolos leoldása előtt 700 ml, ül. 100 ml piridm-jvíz eleggyel (80 ml piridin, 800 ml víz) távolítjuk el az organikus szennyeződések tekintélyes részét, és a tiszta polimixin szulfát oldatot nem liofilizáljuk, hanem 7 térfogatrésznyi metanollal elegyítjük, majd kiszűrjük és kiszárítjuk a polimixin szulfátot. Kiindultunk 3000 ml 2620 E/ml polimixin B tartalmú fermentléből 'és végtermékként 760 mg 6020 E/mg hatóértékű polimixin B szulfátot kaptunk, — 58,2%. 4. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy az antibiotikum első és második sósav-metanolos leoldása előtt 650 4
