156121. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin C elválasztására

5 156121 6 metilizobutilketon-extraktot kapunk. Ezt ellenáramú extraktarban 0,2 ,m foszfátpufferrel (pH 8) extraháljuk. 95 liter 6,5 pH-jú vizes extraktot kapunk. Ebből a 2,4,6-itrinitrofenil-cefalosporin C-t ismételten pH 2-nél metilizobutilketonnal extraháljuk. A kapott 50 liter szerves oldatot 6 pH értéknél háromszor 4—4 liter vízzel extrahaltjuk. Az így képződött vizes extraktot (12 liter) 0—4°-ra hűtjük, a pH-t 6 n sósavval 2-re állítjuk be, a csapadékot leszívatjuk, és 0° körüli hideg vízzel hűtjük. Szárítás után 751 g nyers 2,4,6-trinitrofenil-cefalosporin C marad vissza. A szűrletből még további 269 g termékeit nyerhetünk ki. (Teljes kinyerés 1020 g 45%-os trinitrofenil-oefalosporin C = a számított 69,5%-a.) A szilikagéles vékonyrétegkromatogram n-butanol-jégecet-víz (75 : 7,5 :21) rendszerben piferinsavra vonatkoztatva 0,51 Rfp értéket mutat. Ezenkívül még többé vagy kevésbé poláris 2,4,6-trinitrofenilvegyületek foHtjai is elkülöníthetők. A származékok átalakítása 7^aminocefalosporánsawá (7—ACS) a következők szerint történhet: a) 200 g nyers 2,4,6-trinitrofenil^cefiälospoirin C-t 2 liter metilizobutilketonban szuszpendálunk és 2 liter difenildiazometán (melyet benzoifenonhidrazon niangándioxiddal történő oxidációjával állítunk elő) 600 ml metilizobutilketonos oldatához adjuk. 1,5 óra múlva a sötétvörös oldatot 10 liter petroléterrel hozzuk össze. Ekkor a nyers 2,4,6-trinitrofenil-cefalosporin C-dibenzilhidrilészter világossárga por alakjában kicsapódik. A csapadékot leszívatjuk, petroléterrel mossuk, és vákuumban 40°-on szárítjuk. A termék szilikagéles vékonyrétegkroimiatogramja toluol-aeeton rendszerben (8 : 2) 0,53 Rf^értéket ad. Kitermelés: 280 g diészteir 44%-os tisztasággal, amely a tenyészet levében jelenlevő cefalosporin C 62%-át teszi ki. b) 9,6 g a) szerint előállított dibenzilhidrilésztert 260 ml abszolút matilénkloridban oldunk. Az oldatot •—18°-ra való hűtése után 5 ml vízmentes piridinnel elegyítjük, majd 10 perc alatt keverés közben 7,8 g foszforpentaklorid 100 ml abszolút metilénkloridos oldatát adjuk hozzá cseppenként. Még további 45 percig keverjük —12 — —10°-on, majd 5 perc alatt 64 ml —10°-ra lehűtöirt metanolt adunk hozzá. Az oldatot 40 percig —10°-on, majd egy órán át +10°-on továbbkeverjük, majd keverés közben 110 ml 2 n sósavval elegyítjük. Szétválasztjuk a fázisokat, és a vizes fázist 100 ml metilénkloriddal utánextraháljuk. Az egyesített metilénklaridos fázist vákuumban kíméletesen bepároljuk. Magas vákuumban való szárítás után gyantás, barna 7-aminocefalosporánsav-benzhidrilészter maradékot kapunk. c) 7—ACS4>enzilhidrilésztert 5 ml anizofllban oldunk, hűtés közben 14 ml trifluorecetsavval elegyítjük, 30 percig 20—30°-on reagáltatjuk, és 25 ml trietilamin és 180 ml metanol —10°ra lehűtött elegyét adjuk hozzá. 10%-os vizes szuszpenzió pH-ja 2,3. A pH-t trietilaminnal (6 ml) 3,5-re állítjuk be. —18°-ra hűtjük és kristályosodni hagyjuk. A kristályos csapadékot szívószűrőn elválasztjuk, metanollal, metilénkloriddal és dietiléterrel mossuk, és magas vákuumban szárítjuk. A 7-amino-eefalosporánsavat 83,3%-os tisztaságban kapjuk. A kiter-5 melós 1,62 g, ami a felhasznált 2,4,6-trinitrofenil-oefalosporin C-dibenzilhidrilészterre vonatkoztatva 63,5%. 2. példa: 10 10 liter, 1340 mg cefalosporin C/liiter tartalmú tenyészlevet és 190 mg/liter nitrogént primer aminoesoport formában szűrési segédanyagként 2:% „Celatom" hozzáadásával 60 g 15 2,4,6-trinitrobenzolszulfonsavval elegyítünk, ós miután a pH-t 8,7-re állítjuk be, 2 órán át ezen a pH-értéken tartjuk. Ezután a reakcióelegyet 250 g „Hyflo Supereel"-lel elegyítjük, és a pH-értéket keverés közben 4,3-ra állítjuk 20 be koncentrált kénsavval. A sárga csapadékot a ,,Hyflo"-val együtt leszívatjuk. A tiszta szűrletet 3 liter ecetészterrel elegyítjük, a pH-értéket sósavval 2-re állítjuk be, a fázisokat elválasztjuk és a kissé emulgeált fázist 50 g 25 „Hyflo Supercel" jelenlétében történő szűréssel megtisztítjuk. A vizes fázist még háromszor 1—1 liter ecetészterrel utánextraháljuk. Az egyesített ecetészteres fázist 1 liter vízzel elegyítjük, és a pH-értéket nátronlúggal 30 6,5-re állítjuk be. A fázisokat elválasztjuk. Az ecetészteres fázist még háromszor 0,5 liter vízzel, pH 6,0-nál újraextraháljuk. Az egyesített vizes extraktumot 1 liter ecetészterrel elegyítjük, és a pH-t sósavval 2-re állítjuk be. A fá-35 zisokat elválasztjuk, és a vizes fázist még háromszor 0,5—0,5 liter ecetészterrel utánextrahállijuk. Az egyesített eoetészteres etxraktumot kétszer 0,3—0,3 liter tömény nátriumlklorid-oldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal 40 szárítjuk, és térfogatát 0,5 literrel bepároljuk.' Ezt a koncentrált 2,4,6-trinitro.fenil-cefalospO'rin C oldatot gyenge hűtés közben 0,2 liter 47,5%-os petroléteres difenildiazometán oldattal elegyítjük. 1,75 óra múlva szobahőmérsák-45 léten a 2,4,6^trinitrofenil;-oefalosporin C-dibenzilhidrilészter 3,5 liter petroléterhez történő hozzáadás hatására kiválik. A csapadékot leszívatjuk, és 40°-on vákuumban szárítjuk. A kitermelés 51,2 g 40,4% diészter tártaioirumal, 50 azaz a tenyészet szűrletében a számított cefalosporin C tartalom 76,2%-a. 3. példa: 55 11,76 g pikrilkloridot 36 ml n-butanolban szuszpendálunk és 6,6 g vízmentes nátriumszulfit 72 ml vizes oldatával elegyítjük. 30 perces keverés után az oldat pH-ja 6,5. A vörös realkcióelegyet, amely 15 g 2,4,6-trinitro-60 benzolszulfonsavas nátriumot tartalmaz, 6 liter tisztítatlan cefalosporin C vizes oldatához (számított cefalosporin C-nátriumsó tartalom 12,3 g; nitrogéntartalom primer aminoesoport alakban 1,9%) adjuk. A pH-t nátronlúggal 9-re ál-65 lítjuk be, majd ezután egy óra hosszat 8,5—8,7 3