156121. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin C elválasztására
156121 anioncserélőn acetát formáiban adszorbeálva és piridinacetáttal eluálva kinyerik (v.o. 1 126 564 sz. német szabadalmi leírás). Az eljárásoknak, melyek során a oefalosporin C-t ioncserélőn adszorbeálják, az a hátránya, hogy a cefalosporin C nagy része elbomlik. Olyan eljárást találtunk, melynél a cefalosporin C-t híg vizes oldatból, főleg fermentációs léből, valamilyen származéka alakjában választjuk el, amely különösen alkalmas olyan nagyhatású baktériumellenes vegyüleitekké való továbbalakításra, .melyek 7-aminocefalosporánsavból, mint pl. a 7-tienilacetilamino-sporánsavból vagy 7-fenilacetilamino-ce£alosporánsavtoól származnak. Az eljárást az jellemzi, hogy a vizes oldatban levő cefalosporin C N-triniitrolbenzolszulfonsawal való reagáltatásával N-trinitrof enil-cefalosporin C-t képezünk és azt az oldatból kiválasztjuk. A trinitrof enil-cefalasporin C már ismert például a 246 920 és 234 907 sz. osztrák szabadalmi leírásoíklból. Ezideig pikrilklorid segítségével állították elő. Ez az eljárás azonban cefalosporin C-nek hígított vizes oldatból való kiválasztására nem alkalmas, mivel a pikrilklorid vízben nem oldódik és a reakcióhoz szükséges alkalikus reakcióközegben instabil. Meglepetésszerűen arra a megállapításra jutottunk, hogy a cafalosporin C-t igen erősen hígított, pl. kb. 0.1l0 /o^os vizes oldatból trinitrobenzolszulfansav segítségével jó kitermelési eredménnyel ki lehet választani anélkül, hogy technikailag meg nem engedhető, többlet reagensmennyiséget kellene felhasználni. Az eljárás felhasználható nyers cefalosporin C tisztítására is, amikor a nyersterméket vízben vagy oldószerben feloldjuk, és az oldatot az említett módon kezeljük. Alkalmazhatjuk még az eljárást az oldalláncban szabad aminocsoportot tartalmazó cefalosporin C származékok, mint pl. a oefalosporin C észtereinek tisztítására is. Ha a találmány szerinti új eljárást fermentációs lében levő cefalosporin C elválasztására alkalmazzuk, a reakciót vagy a tenyészet szűrletében, vagy közvetlenül a fermentáció során keletkezett tenyészet levében végezzük. A trinitrobenzolszulfonsaivval történő reakciót célszerűén szobahőmérsékleten, és 7—10, előnyösen 8,5—9 pH értékek között végezzük. A trinitrobenzolszulfonsavat szilárd vagy oldott formában, keverés közben adjuk a cefalosporin C-tartalmú oldathoz és gondoskodunk arról, hogy az egész reakció ideje alatt, kb. 1—2 órán át, a pH a megkívánt értéken maradjon. Trinitrobenzolszulfonsav oldatot általában úgy készítünk, hogy pikriikloridot szulfittal, pl. nátrium-, kálium- vagy amimóniumszulfittal reagáltatunk. Az oldatot minden további feldolgozás nélkül felhasználhatjuk. Lehetséges továbbá a trinitrobenzolszulfonsavat közvetlenül a cefaloisporin-C-tartalmú oldatban előállítani, amikoris az oldathoz pl. pikriikloridot és nátriumszulfitot adunk. A reakció befejezése után a pH-t 1—3, általában 1,8—2 érték közé állítjuk be, és elválasztjuk a trinitrof enil-cef alosporin C-t. Ez előnyösen vízzel nem elegyedő oldószeres vagy 5 oldószarkeverékes extrakicióval történik, így példaképpen vízzel mem elegyedő alkohollal, főleg 4—6 szénatamioís rövidszénláncú al'kanollal, pl. n-butanoUal, aimilalkohollal, pl. n-amiflalkohollal, n4iexilallkohollal, 2-etil-n-bu-10 tanoUal; vagy benzilalkahollal; vagy észterrel, előnyösen rövidszénláncú affikánsavalk, pl. ecetsav, propionsav, vajsav rövidszénláncú alkilészterével, pl. eoetsavetilészterrel, eoetsavbutilészterrel; vagy egy vízzel nem elegyedő keton-15 nal, főleg rövidszénláncú dialkil-ketonnal, pl. dietilketonnal vagy metil-i^butiffiketonnal; helyettesítetlen vagy helyettesített, főleg klórozott szénhidrogénnel, pl. klórozott aílkánnal, mint metilénklorid, kloroform, etilénklorid; 20 vagy ezeknek az oldószereknek keverékeivel. Extrahálhatunk továbbá még folyékony bázikus ioncserélőkkel a megadott oldószerekben vagy oldószer elegyekben, pl. Arnberlite LA— 2-vel n-butilacetátban vagy 2-etil-n-butandl-25 ban. . A trinitrofenil-oefalosporin extrahálása helyett azt az oldatból kicsaphatjuk, példaképpen oly módon, hogy a pH-t 1—3, előnyösen 1,8—2 között állítjuk be. 30 A trinitrofenil-oefalosporin 7-amino-eefalosporánsawá (7—ACS) történő átalakítása céljából a vegyületet észterezhetjük, és példaképpen az 1 041 985 sz. brit szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint alakíthatjuk át 35 7—ACS-á. A találmányt a következő példákban ismertetjük. A hőmérsékleti értékeket Celsius fokban adjuk meg. 40 1. példa: . 370 1 cefalosporin C-tartalmú tenyészoldatot 2,72 kg oxálsav 10 1 vizes oldatával és 0,9 1 1 : 1 arányú víz-nkonoentrált kénsav elegyével 45 egyesítünk, hogy a pH 3 értékre álljon be. 8 kg „Celatom" (diatomaföld) szűrősegédanyagként való hozzáadása után szűrőprésen leszűrjük. A tiszta szűrlet (320 1) 1,57 g cefalosporin C-t tartalmaz literenként (cefalosporin Onát-50 riumsó-dihidrátra számítva). A nedves szűredéket (62 kg) eldobjuk. A szűrüetet 920 g 7,5 pH-s 2,4,6-trinitrobenzolszulfonsavas nátrium oldathoz adjuk, melyet úgy készítünk, hogy 796 g vízmentes nát-55 riumszulfitot 3,35 liter ionmentesített vízben oldunk, 1 kg jeget, majd 15 perc alatt, keverés közben, 1,425 kg pikrilklorid 4,35 liter acetonos oldatát adjuk hozzá. Az elegy pH-ját koncentrált nátronlúggal keverés közben 9-re 60 állítjuk be, majd 4 óra hosszat 26°-on 8,5—8,7 pH-n tartjuk. A vörös színű reakcióoldatot, mely a 2,4,6-trinitrofenil-cefalosporin C-t tartalmazza, 1,5—2 pH értéknél, melyet 5 n kénsawal állítunk be, ellenáramú extraktorban 65 metilizobutilketonnal extraháljuk. 190 liter
