155987. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorsztatikus hatású szer előállítására

155987 11 12 az 1:2 000 000 hígításig elpusztultak fertőzés következtében. Ezzel szemben a PC—B—45 készítmény még 1 :2000 hígítás esetében sem mutatott virulenciát. Ezek a kísérletek tehát azt bizonyítják, hogy a virulens FC—B készítmény megadott módon történő hőkezelése útján a lényegesen kevésbé virulens PC—B—45 készítményhez juthatunk. V. táblázat Négy különböző Sv-törzsű Streptococcus készítmény virulenciájának összehasonlítása, a fertőzés következtében 48 órán belül elhulló egerek számának meghatározása alapján Streptoeoccuskészítmény, Sv-törzs 1 :I2IOOO* 1:2X1104 1:2X105 1:2X106 1:2X107 1 : 2X110« 1:2X10» B 2 2 2 2 0 0 0 PC—B 2 2i 2 2 1 0 0 B—45 2 2 2 2 0 0 0 PC—B—46 0 0 0 0 0 0 0 * Az 1 : 2000 hígítású Streptoioacciis45észítményben jelenlevő coccusok megfelelnek az eredeti tápközeg 1 :100 hígításában jelenlevő coocusolknak. 5. példa: E példa a penicillinnek a Streptococcus-szuszpenziók (ATCC 21060) S-sztreptolizin-Jaépző képességére való befolyását szemlélteti. Egy kémcső-sorozatban, amelyben az egyes kémcsövek 3—3 ml-t tartalmaztak egy 2,5 ml eredeti kokkusz-szuszipemzióból (BBM közegben) és 0,5 ml 24X104 E/ml koncentrációjú penicillinoldatból álló elegyből, valamint egy ellenőrző kémcső-sorozatban, amelyben az egyes kémcsöveik 3—.3 ml-t tartalmaztak egy 2,5 ml eredeti kokkusz-szuszpenzioból (BBM közegben) és 0,5 ml fiziológiás konyhasó oldatból álló elegyből, az összes kémcsöveket 20 percig inkubáltuk 37 C° hőmérsékleten. Ezután az egyik kémcső-sorozatból egy oly kémcsövet, amely 4X104

E/ml penicillin tartalmú kokfcusz-szuszpenziót tartalmazott, valamint a másik kémcső-sorozatból ugyancsak egy kémcsövet, amely penicillin nélküli kokkusz-szuszpenzió't tartalmazott, 30 perc időtartamra egy meghatározott hőmérsékletű (0, 37, 45, 56, ill. 70 C°) vízfürdőbe helyeztünk. A kapott két szuszpenziót ezután megvizsgáltuk a kokkuszok S-sztreptolizin-képző képességére. Ezt a vizsgálatot az alábbi módon végeztük: 1. A kokkuszokat elkülönítettük a leírt módon kezelt szuszpenzióiból. i2. A leülepített kokkuszokat egy nyugvó sejtrendszert biztosító közegben (0,1%. RNC a BBM közegben) szuszpendáltuk, majd ezt követően 2 óra hosszat inkubáltu'k 37 C° hőmérsékleten. 3. 20 percig centrifugáltuk a szuszpenziót, percenként 3500 fordulattal, és így tiszta .felülúszó folyadékot állítottunk elő. 4. Az így kapott tiszta folyadékban meghatároztuk a hemolitikus aktivitást. A tiszta felülúszó folyadékot fiziológiás konyhasó oldattal hígítva, sorozat-hígítást készítettünk. A hígított folyadékból mindenkor 25 30 35 40 45 50 55 60 65 1 ml mennyiséget 1 ml 3%-os mosott nyúl^erythroicyta-szuszpenzióval elegyítettünk és az elegyet 2, óra hosszat inkubáltuk 37 C° hőmérsékleten. A felülúszó folyadék hemolitikus aktivitását egységekben fejeztük ki; 1 hemolitikus egységnek (1 H. E.) azt a S-sztreptolizin menynyiséget tekintettük, amely a megadott körülmények között az erythrocyták felének fokozatos eltűnését eredményezte (50%-os bemolízis). A hemolitikus egységek száma tehát a Streptococcusok S-sztreptolizin képző képességének kritériumaként szolgál. A kapott eredményeket az alábbi VI. táblázatiban foglaltuk össze. VI. táblázat A kokkusz-szuszpenzió előzetes kezelése S-sztrepto-szuszpenzió In

,

ku

;

bálás

3

,

0

perces lizin készítéséhez 37

c

o_

on

kczelés

H

. E./ml használt közeg c

C°-on A kokkusz-4X10* E/rail 20 0 1,971 penicillint 20 37 1,318 tartalmazó 20 45 <1 BBM közeg 2i0 56 <1 20 70 <1 20 0 2,457 20 37 .2,076 BBM közeg 20 45 .3,456 20 56 <1 20 70 <1 A 4X104

E/ml penicillint tartalmazó BBM közegben szuszpendált kokkuszok 45 C° hőmérsékleten 30 percig történő hevítése a kokkuszok S-sztreptolizin-képző képességének teljes elvesztését eredményezte. 6. példa: 100 ml húsifőzethez ribonukleáz-magokat adtunk, oly módon, hogy a közegben a RNC kon-6