155987. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorsztatikus hatású szer előállítására
155987 13 14 centrációja 0,8% legyen. A 7,56 pH-értékű közeget sterilizáltuk. Az így kapott közeget a Streptococcus heamolyticus ATCC 21060 törzs 20 órás kultúrájával oltottuk be és 20 óra hosszat inkubáltuk 37 C° 5 hőmérsékleten. Ezután a tenyész-folyadékot lehűtöttük és centrifugáltuk, a leülepedett kokkuszakat fiziológiás konyhasó oldattal kétszer mostuk, majd 5 ml BBM közegben (előállítva 675 mg maltózból, 6 ml 20%-os KH2P0 4 oldat- io ból, amelyet nátriumhidroxiddal 6,9 pH-értékre állítottunik be, 12 ml 2%-os MgS04 • 7H2 0 oldatból és 66 ml desztillált vízből) szuszpendáltuk. A kapott kokkusz-szuszpenziót BBM közeggel tovább hígítottuk és így tízszeres hígítású szusz- 15 penziót készítettünk. 2,5 ml ilyen hígított kokkusz-szuszpenzióhoz 0,5 ml oly penicillin oldatot adtunk, amelyet benzilpenicillin-káliumsó fiziológiás konyhasó oldatban 16X10* E/ml koncentrációban való oldása útján készítettünk. 20 Az elegyet 20 percig inkubáltuk 37 C° hőmérsékleten, majd ezt követően 30 percig hevítettük 45 C°-on. Az így kezelt kokkusz-szuszpenzióhoz az 1. példában leírt ráksejt-szuszpenzió 1 ml-ét adtuk, 25 majd az elegyet 60 percig inkubáltuk 37 C° hőmérsékleten. Ezután az elegy 0,5 ml-es adagjait adtuk be egereknek intraperitoneális injekcióban. A beadás után 50 nappal megállapítottuk a túlélő egereik számát. 6 egér közül csak 1 hul- 30 lőtt el rákban. A túlélő 5 egeret leöltük és boncolásnak vetettük alá. Tumor egy egéren sem volt található. Az ellenőrző kísérletiben, amelynek során csupán BBM közeget és penicillin-tartalmú BBM közeget alkalmaztunk, az 35 injekció beadása után 35 napon belül mind a hat egér elhullott. A találmány szerinti eljárásban az elkülönített kokkuszoknak a szuszpendáló közegben történő előzetes kezelésére bármely természetes 40 úton, tehát fermentáció útján előállított vagy félszintetikus penicillin alkalmazható. Az e célra felhasználható penicillinek jellemző példáiként a G-penicillin (benzilpenicillin), a 2,6-dimetoxiifenilpenicillin, valamint ezek nátriumsói 45 említhetők. Az alkalmazásra kerülő „ribonuclease-core'' készítmény W. A. Bernheimer és M. Rodbardt, The Journal of Experimental Medicine, 88, 149 (1948) módszere szerint, a ribonukleinsav (RNS) 50 ribonukleázzal történő hidrolízise és a hidrolizátum etanolos kicsapása útján állítható elő. Ez a RiNS ribonukleázzal végzett teljes hidrolízise után savban oldhatatlan frakció. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás tumorsztatiikus hatású szer előállításaira, amelynek során a Streptococcus haemolyticus sejtjeit glukóz adaléktól mentes tápközegben tenyésztjük, majirl az elkülönített sejteket egy penicillintartalmú közegben szuszpendálva 30—38 C° hőmérsékleten inkübáljuk, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 25 000^120000 egység/ml penicillin-koncentrációjú közegben végezzük, majd a szuszpenziót 38—50 C°, előnyösen 45 C° körüli hőmérsékleten további hőkezelésnek vetjük alá. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a Streptococcus haemolyticus tenyésztését ribonukleinsav és/ vagy ribonukleáz^magok jelenlétében folytatjuk le. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a Streptococcus haemolyticus tenyésztését 0,5'—1 súly/tf.% koncentrációjú ribonukleinsav és/vagy ribonükleáz-magük jelenlétében folytatjuk le. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy a Streptococcus haemolyticus tenyésztéséhez tápközegként húsfőzetet alkalmazunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az elkülönített sejtek szuszpendálására az 1. igénypontban megadott penicillin-tartalmú Bernheimer->féle bazális közeget (BBM) vagy foszfáttal pufifeirezett konyhasó oldatot alkalmazunk. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az elkülönített sejteket egy 27 000—6OO00 egység/ ml penicillint tartalmazó szuszpendáló közegben szuszpendáljuk. 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a sejtszuszpenzió inkubálását 10—30 percig, az ezt követő hőkezelést pedig 20—60 percig folytatjuk. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a sejtek inkubálását 20 percig 37 C° hőmérsékleten, a hőkezelést pedig 30 percig 45 C° hőmérsékleten folytatjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6908390. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. T
