155643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipoallergén penicillin-származékok előállítására
155643 13 III. táblázat 14 A kék színeződés átmérője az Vizsgált alfa- antitest-reakció helyén, mm -fenoximetilpenicillin i/50 2/250 1/1250 1/6250 1/31 250 antitest-hígítás esetén Kereskedelmi minőség 30+ 30+ 20 Tisztított anyag — — — 14 10 lizáltuk áramló vízvezetéki vízzel szemben. Az így kapott retentátumot újabb bepárlás útján 50 ml térfogatra pároltuk be és sokszor váltott desztillált vízzel szemben további 3 napig dializáltuk. A kapott végső retentátumot fagyasztva szárítottuk és így 90 mg szilárd anyagot kaptunk. A biológiai meghatározás eredménye szerint e szilárd anyag penicillintartalma 1 súly% alatt volt. A penamaldát-módszerrel végzett elemzés eredménye szerint ez az anyag számottevő százalékarányban tartalmazott penicilloil-csoportokat a nagymolekulasúlyú anyaghoz kötött állapotban. Az anyag penicilloinsav-tartalma papírkromatográfiai módszerrel mérve azonban szintén 1 súly%-nál kevesebbnek bizonyult. A fenti módon kapott és elkülönített nagymolekulasúlyú szilárd anyag P.C.A. próbával vizsgálva képesnek mutatkozott az ismerten penicillcil-specifikus antitestekkel való reagálásra. Ez a nagymolekulasúlyú anyag komplett antigénnek bizonyult. Nyulaknak komplett Freundféle adjuváns jelenlétében injekcióban beadott 5 mg anyag antitest-termelést váltott ki. 26. példa 20 g feneticillin-káliumsót 100 ml vízben oldottunk és a 14. példában leírthoz hasonló módon Sephadex-oszlopra vittük. A penicillintartalmú frakciókat összegyűjtöttük és a feneticillmt fagyasztva szárítás útján kinyertük. A kapott végterméket P.C.A. próbával vizsgáltuk és azt találtuk, hogy sokkal kevesebb antigén-anyagot tartalmaz, mint a kiindulóanyag. 17. példa 200 g propicillint a 15. példában leírthoz hasonló módon dializáltunk; 400 mg szilárd anyagot kaptunk. Ez az anyag elkülönítése után képesnek mutatkozott pozitív reakció kiváltására a P.C.A. próbában. 28. példa 20 g ampicillint a 15. példában leírt módon dializáltunk és a visszatartott anyagot betöményítettük. 720 mg szilárd anyagot kaptunk; ezt elkülönítettük és azt tapasztaltuk, hogy ez a termék a P.C.A. próbában pozitív reakció kiváltására képes. Emellett 1 mg ilyen anyagot tengerimalacnak injekció útján beadva, az injekció szenzitizálta a tengerimalacot és így egy későbbi második injekció anafilaxiás sokkot váltott ki. 5 29. példa 20 g ampicillin-nátriumsót 100 ml vízben oldottunk és egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött, 6,3 cm átmérőjű, 106,7 cm hoszszú oszlopra vittük. A penicillint vízzel eluáltuk, 10 600 ml/óra áramlási sebességgel. Az elemzés útján penicillintartalmúnak talált frakciókat összegyűjtöttük és az ampicillint fagyasztó szárítással kinyertük. A végterméket a fentebb leírt módon P.C.A. próbával vizsgáltuk. A végterméket a 15 kiindulóanyaggal összehasonlítva azt tapasztaltuk, hogy az előbbi lényegesen tisztább. 20. példa 15 mg meticillint 75 ml vízben oldottunk és a 20 19. példában leírthoz hasonló módon Sephadexoszlopra vittük. A penicillintartalmú frakciókat összegyűjtöttük és a meticillint fagyasztó szárítás útján kinyertük. A végterméket a fentebb leírt módon P.C.A. próbával vizsgálva megállapít-25 hattuk, hogy az az eredeti meticillinhez képest számottevő mértékű tisztításon ment keresztül. 21. példa 500 g meticillint a 15. példában leírthoz ha-30 sonló módon dializáltunk és így 105 mg szilárd anyagot kaptunk. Ez az anyag P.C.A. próbával vizsgálva pozitív reakció kiváltására képesnek bizonyult. 35 22. példa 500 g cloxacillint a 15. példában leírthoz hasonló módon dializáltunk és így 1,1 g szilárd anyagot kaptunk. Ez az anyag P.C.A. próbával vizsgálva pozitív reakció kiváltására képesnek 40 bizonyult. 23. példa 20 g cloxacillint vízben oldva 20%-os töménységű oldatot készítettünk és ezt eagy Sephadex 45 G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött, 6,3 cm átmérőjű és 1067 cm hosszú oszlopra vittük. A penicillint iontalanított vízzel eluáltuk, 500 ml/óra áramlási sebességgel. A penicillintartalmú frakciókat a hidroxilaminos módszerrel végzett vizs-50 gálattal azonosítottuk; ezeket a frakciókat összegyűjtöttük és csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A maradékhoz acetont adtunk és lehűtöttük. A kapott kristályos cloxacillint szűréssel elkülönítettük. Mind az így kapott végterméket, 55 mind pedig az eredeti kiindulóanyagot P.C.A. próbával vizsgáltuk a fentebb leírt módon. Az eredeti anyag és a kapott végtermék összehasonlítása azt mutatta, hogy az anyag számottevő mértékű antigén-tisztításon ment keresztül. 60 24. példa Cloxacillin 15%-os vizes oldatához metiléndikloridot adtunk, a pH-értéket 2,5 körülire állítottuk be és a terméket a szerves fázisba extra-65 háltuk. A szerves fázist azután elkülönítettük, 7
