155643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipoallergén penicillin-származékok előállítására

155643 11 12 4,32 g tisztított 6-amino-penicillánsavat 20 ml vízben cseppenkint hozzáadott 19,6 ml n-nátriumhidroxid-oldattal kezelve, 7,3 pH8 értékű tiszta oldattá alakítottunk. Ezt az oldatot élénken kevertük és közben 3,41 g alfa-fenoxiacetilklorid 40 ml metilizobutilketonnal készített oldatát adtuk eléggé gyors ütemben hozzá. A kapott elegyet 45 percig élénken kevertük, majd diatomaföldön keresztül leszűrtük és a két frakciót szétválasztottuk. A savas vizes réteget 1 ml n-sósavoldattal 1,5 pH-értékre savanyítottuk, majd 20 ml metilizobutilketonnal extraháltuk. A két szerves fázist egyesítettük és 9,5 ml 2 n káliumhidrogénkarbonát-oldattal kiráztuk; ilymódon 7 pH-értékű vizes kivonatot kaptunk. Ezt alacsony hőmérsékleten és csökkentett nyomás alatt bepároltuk; 12,5 g maradékot kaptunk, ehhez 80 ml izopropanolt adtunk, az elegyet hűtőszekrényben 2 óra hosszat hűtöttük, majd a levált szilárd anyagot elkülönítettük és levegőn megszárítottuk. Ilymódon 7 g alfa-fenoximetilpenicillin-káliumsót (az elméleti hozam 90%-a) kaptunk. A termék hidroxilaminos vegyszerrel vizsgálva 91%-os tisztaságúnak, alkalimetries vizsgálattal pedig 99,5%-osnak mutatkozott. 12. példa 85 g kereskedelmi minőségű alfa-fenoxilmetilpenicillin-káliumsót 100 ml vízben oldottunk. Ezt az oldatot egy 57 mm átmérőjű cellofán-tömlőbe helyeztük és 1 liter vízzel szemben 20 óra hoszszat dializáltuk. A dializátum vákuumban való betöményítése, majd fagyasztó szárítás útján az alfa-fenoximetilpenicillint kinyertük. Az így tisztított penicillin 2 g-ját vittük fel a ReCyChrom készülékben Sephadex G25 oszlopra vittük és az eluátum ibolyántúli abszorpcióját 254 millimikronnál vizsgáltuk. A kapott abszorpciós színképet összehasonlítottuk a kiinduló alfa-fenoximetilpenicülin ugyanilyen körülmények között felvett ibolyántúli abszorpciójával. Azt találtuk, hogy a penicillin-csúcsértéket megelőző zónából vett nagymolekulasúlyú frakciók erős passzív kután anafilaxiás reakciót váltanak ki tengerimalacokon, míg a dializált alfa-fenoximetilpenicillin kb. ötször gyengébb paszszív kután anafilaxás reakciót ad, mint amilyen az ellenőrző vizsgálatban fellép. A kapott eredményeket az alábbi II. táblázatban foglaltuk öszsze: II. táblázat A kék színeződés átmérője az Vizsgált alfa- antitest-reakció helyén, mm fenoxi-metil-penicillin 1/50 1/250 1/1250 1/6250 1/31 250 antitest-hígítás esetén Kereskedelmi minőség Tisztított anyag 27 26 18 16 11 3 — Ezek az eredmények mutatják, hogy a dializált alfa-fenoximetilpenicillin ötször kevesebb szenynyező anyagot tartalmazott, mint a kiindulóanyagként alkalmazott kereskedelmi minőségű 5 penicillin. 13. példa 500 g kereskedelmi minőségű alfa-fenoximetilpenicillint 2000 ml vízben oldottunk és áramló 10 vízvezetéki vízzel szemben 2 napig dializáltuk, Visking dializáló tömlővel. A retentátumot azután 500 ml térfogatra pároltuk be és további 2 napig dializáltuk, azután ismét bepároltuk 50 ml térfogatra és sokszor váltott desztillált vízzel 15 szemben 3 napig dializáltuk. A végső retentátumot azután fagyasztva szárítottuk és így 75 mg szilárd anyagot kaptunk. Ez az elkülönített nagymolekulasúlyú anyag a P.C.A. próbával vizsgálva reagálni volt képes az 20 ismerten penicilloil-specifikus antitestekkel. 14. példa 20 g kereskedelmi minőségű alfa-fenoximetilpennicilinkáliumsót 100 ml vízben oldottunk és 25 egy 7,6 cm átmérőjű, 91 cm hosszú, Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopon vezettük keresztül az oldatot 500 ml/óra áramlási sebességgel. A nagymolekulájú szennyező anyag a penicillin előtt vándorolt lefelé az osz-30 lopon. Ezt a nagymolekulájú anyagot összegyűjtöttük és előzetes töményítés nélkül vizsgáltuk anti-penicilloil antiszérum intradermális injekciója útján passzívan szenzitizált tengerimalacokon; az anyag nagy mértékű passzív kután ana-35 filaxiás reakciót váltott ki. A penicillintartalmú frakciókat is összegyűjtöttük az oszlopról és vákuumban történő betöményítés, majd fagyasztva szárítás útján kinyertük az alfa-fenoximetilpenicillint. Ilymódon 11,2 40 g tisztított terméket kaptunk. 2 g így tisztított penicillint a ReCyChrom-készülékben Sephadex G25 oszlopra vittük és az eluátum-frakciók ibolyántúli abszorpcióját 254 millimikronnál vizsgáltuk. A kiinduló alfa-fen-45 oximetilpenicillin ugyanilyen körülmények között felvett ibolyántúli abszorpciójával összehasonlítva azt találtuk, hogy a penicillin-csúcsértéket megelőzve haladó nagymolekulasúlyú frakciók anyaga passzív kután anafilaxiás reakciót 50 vált ki tengerimalacokon, míg a tisztított alfa-íenoximetilpenicillin esetében a megfelelő frakciók egyáltalában nem váltottak ki ilyen reakciókat a tengerimalacokon. A kapott eredményeket a III. táblázatban foglaltuk össze. 55 Ezek az eredmények az mutatják, hogy a tisztított anyagból minden szennyező anyag el lett távolítva. 60 65 15. példa 500 g feneticillint 2000 ml vízben oldottunk és áramló vízvezetéki vízzel szemben 2 napig dializáltuk Visking dializáló tömlő segítségével. A retentátumot azután 500 ml térfogatra töményítettük be bepárlás útján és további 2 napig dia-6