155643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipoallergén penicillin-származékok előállítására

155643 9 10 Az elkülönített nagymolekulasúlyú anyag reakcióképesnek mutatkozott az ismeretlen penicilloil-specifikus antitestekkel. 5. példa 2 g 2-tienilpenicillint a 4. példában leírthoz hasonló módon egy Sephadex G25 molekuláris szűrővel töltött oszlopon vezettünk keresztül. Ebben az esetben is az ibolyántúli abszorpciót mutató zónát eluáltuk; e zóna helyzete azt mutatta, hogy az anyag molekulasúlya 4000 felett van. Ezt a frakciót a P.C.A. próbával vizsgáltuk és azt találtuk, hogy az reakciót vált ki az ismerten penicilloil-specifikus antiszérummal passzívan szenzitizált tengerimalacokon. 6. példa 2 g p-metoxibenzilpenicillint a 4. példában leírthoz hasonló módon egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopon vezettünk keresztül. Az ibolyántúli abszorpció jelentős mennyiségű nagymolekulasúlyú anyagnak, valamint egy további, szintén a penicillin előtt eluálódó anyagnak a jelenlétét mutatta. Mindkét frakciót, valamint további, a penicillin-csúcsérték előtt mozgó frakciókat is a P.C.A. próbának vezettünk alá és azt tapasztaltuk, hogy mindezek reakciót váltanak ki az ismerten penicilloilspecifikus antiszérummal passzívan szenzitizált tengerimalacon, ami azt mutatja, hogy antigén anyag volt jelen a penicillinben, amelyet a Sephadex könnyen elválasztott a pinicillintől. 7. példa 2 g n-butoximetilpenicillint a 4. példában leírthoz hasonló módon egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopon vezettünk keresztül. Az ibolyántúli abszorpció alapján számottevő mennyiségű nagymolekulasúlyú anyagnak, valamint egy további, szintén az oszlopon a penicillin előtt haladó anyagnak a jelenléte volt kimutatható. Mindkét említett frakciót, valamint további, a penicillin-csúcsérték előtt mozgó frakciókat P.C.A. próbának vetettünk alá és azt találtuk, hogy mindezek az anyagok reakciót váltanak ki az ismerten penicilloil-specifikus antiszérummal passzívan szenzitizált tengerimalacon. 8. példa 2 g n-propoximetilpenicillint a 4. példában leírthoz hasonló módon egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopon vezettünk keresztül. Az ibolyántúli abszorpciós vizsgálat azt mutatta, hogy egy, a penicillin előtt mozgó anyag van jelen. Az e helyről vett frakciók P.C.A. vizsgálata során kitűnt, hogy ez az anyag reakciót vált ki az ismerten penicilloil-specifikus antiszérummal passzívan szenzitizált tengerimalacon. 9. példa Fermentációs eljárással, megfelelő oldallánc-prekurzorok jelenlétében p-fluorfenoxi-, p-aminofenil-, butiltio-, benziltio- és p-klórfenil-metil-penicillineket állítottunk elő. Ezek mintáit azután a 4. példában leírt módon egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopon vezettük keresztül. Az ultraibolya abszorpciós vizsgálat azt mutatta, hogy minden esetben volt 5 jelen az oszlopon a penicillin előtti zónában mozgó anyag. Az e zónából vett frakciókat P.C.A. próbával vizsgáltuk és azt találtuk, hogy azok reakciót váltanak ki az ismerten penicilloil-specifikus antiszérummal passzívan szenzitizált ten-10 gerimalacon. 10. példa 500 g 6-amino-penicillánsavat az 1. példában leírthoz hasonló módon dializáltunk; 2,5 g szi-15 lárd anyagot kaptunk. Ez az anyag pozitív reakciót váltott ki P.C.A. próbában a penicilloil-specifikus antiszérummal szenzitizált tengerimalacon. Antitest-termelés volt kimutatható oly nyula-20 kon is, amelyeknek 10 mg-os adagban adtuk be injekció útján a szilárd dializálási maradékot; hasonlóképpen tengerimalacokon is 250 meg beadása esetén. Ez a kísérlet a kereskedelmi minőségű 6-ami-25 no-penicillánsavból elválasztható nagymolekulasúlyú anyag természetére vonatkozólag nyújt tájékoztatást. 11. példa 30 4 g kereskedelmi minőségű 6-amino-penicillánsavat- 10 n nátriumhidroxidoldat óvatos hozzáadása útján oldatba vittünk, majd az oldat végső pH-értékét kb. 7,5-re állítottuk be, végső térfogatát pedig 15 ml-re. Az így kapott oldatot 35 egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött, 56 X 8 cm méretű és 0,5%-os vizes nátriumkloridoldattal egyensúlyba állított oszlopon vezettük keresztül. Az oszlopot azután 0,5%-os vizes nátriumkloridoldattal eluáltuk. 40 10 ml-es frakciókat fogtunk fel és ezeket 254 és 280 millimikronnál vizsgáltuk. A 6-amino-penicillánsavat tartalmazó frakciókat hidroxilaminos módszerrel azonosítottuk; ezeket a frakciókat egyesítettük, csökkentett nyomás alatt be-45 töményítettük és a 6-amino-penicillánsavat sósavval lecsaptuk. A kristályos 6-amino-penicillánsavat kis térfogatú jéghideg vízzel mostuk és levegőn megszárítottuk. 50 Az így kapott anyagot ismét egy Sephadex G25 molekuláris szűrőanyaggal töltött oszlopra vittük és az eljárást megismételtük. A 6-amino-penicillánsavat tartalmazó frakciókat ismét egyesítettük, betöményítettük és a 6-amino-peni-55 cillánsavat kicsaptuk, majd a kapott anyagot újból feloldottuk és harmadszor is felvittük egy Sephadex G25 oszlopra. A végső 6-amino-penicillánsav-tartalmú frakciók negatív eredményt mutattak a P.C.A. próbá-60 ban, míg az első és második tisztítási műveletből kapott megfelelő frakciók pozitív reakciót adtak. A harmadik tisztítási műveletből kapott 6-amino-penicillánsavat az alább leírt módon acilez-65 tük alfa-fenoxi-metilpenicillinné. 5