155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
17 155254 18 hidráttal együtt feloldjuk 3,9 ml piridin és 3,9 ml dimetilforimamid elegyéfoen, majid 1,2 g dicikloíhexil&arbodiimid hozzáadása után két napon át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A reakció során kivált diciklohexilkarlbamidot kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, a maradékot kloroformban oldjuk és 0 C° hőmérsékleten mossuk híg sóisawal, vízzel, majd magnéziumszulfáton megszárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékot ismét oldjuk kloroformban és éterrel kicsapjuk. A csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. 3,6 g (84,5%) vé'dett heptapeptidészter^kló'ríhidrátot kapunk. R1 0,43—0,5<3, Rf5 0,1—0,25. [ia] 20 D=—41° (c=l, etanolban). C52H77O12 N12CI (1097,69). Számított: C 56,9, H 7,1, N 15,3, Cl 3,25%. Talált: C 56,55, H 7,1, N 15,3, Cl 2,3 %. 30. lépés: Z-Arg-Tyr-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OH-BC1 (8—14) 9,9 g védett heptapeptidészter-klórhidrátot feloldunk metanolban és IS ml 1 n nátrium-hidroxidot adva hozzá egy órán át állni hagyjuk, majd 1,08 ml jégecettel semlegesítjük. Az oldatot bepároljuk és a maradékot 200 g szilikagélből készített oszlopon (3X70 cm) kromatografáljufc etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 : 20 : 6 :11) elegyben. A tiszta főterméket frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk, a maradékot ktoroifonm-ibutanol (1 : 1) elegyében oldjuk és 0 C° hőmérsékleten előbb 0,5 n sósavval, majd vízzel mossuk, szárítjuk. Az oldat bepárlása után kapott maradékot éterrel eldörzsöljük. 6,15 g (64%) védett heptapeptid-klórhidrátot nyerünk. Rf* 0,14-^0,20. [Ö]20 D = — 29" (c=l, etanolban). C5,)H73 0 12 N 12 C1 {1068,64). Számított: C 56,14, H, 6,88, N15,72%. Talált: C 56,2, H 7,0, N 15,7 %. 31. lépés: H-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OH-HC1 (8—14) 6,0 g védett heptapeptid-klórhidrátot feloldunk metanolban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A dekarbobenzoxilezés végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a párlási maradékot éterrel eldorzsöljük; 4.25 g (81,5%) heptapeptid-klórhidrátot nyerünk. Rf1 0,04—0,14, Rf 7 0,90—0,58. Trifluorecetsavas szolvolízis után Rf1 0,0, Rf 7 0,33—0,41. [CÍ]20 D=— 30° (c=l, etanolban). CÍ2 H 67 0 1( >N 12 C1 (935,51). Számított: N 17,97, Cl 3,8%. Talált: N 18,0, Cl 3,7%. 32. lépés: Z-Glu(OBu 0-His-Pihe-iOMe <5—7) 11,8 g Z-His-Phe-OMe [St. Guttmann és R. A. Boissonnas: Helv. Clhim. Acta 41, 1852 (1958)] védett dipeptidet 1,04 g sósavat tartalmazó metanolban feloldunk és csontszenes palládium jelenlétében a védő karlbobenzoxí csoportot hidrogenolizáljuk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a kristályos maradékot metanol-éter elegyből átkristályosítjuk. A nyert dipeptidészterklórhidrát 6,4 g (70%). Az anyagot 6,87 g karbobenzoxiglutaiminsav-^y-tercJbiutilHcS-íp-nitrofenil)-észterrel együtt feloldjuk 90 ml dimetilfermamidban, majd 2,6 ml trietilarnint adva hozzá két napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakicióelegyet bepároljuk, a maradékot etilacetát-víz elegyben feloldjuk, majd a vizes fázis elválasztása után az organikus részt .mossuk 5%-os vizes tirietilamin-oldattal, vízzel; szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradéíot metanol-víz elegyből kristályosítjuk. 7,5 g (78%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 180'—182 C. 33. lépés: Z-Glu(OBu 0-His-Phe-N2 H3 (5—7) 12,7 g védett tripeptidésztert feloldunk metanolban és szofoalhőimérsékleten 3,2 ml 94% hidrazinShidrát-oldatot adva hozzá három napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk, a ^maradékot kénsav mellett vákuumban szárítjuk. A nyert habot etanol-víz (1 : 1) elegyből kristályosítjuk. 11,0 g (86,5%) védett tripeptidhidrazidot kapunk. Op.: 209—210 C°. 34. lépés: Z-Glu(OBu 0 -His-Phe-Arg-Try-Gly-Ly s(BOC)-Pro-Val-Gly-OH (5—14) 9,0 nil dimetilformamidban feloldunk 3,2 g védett tripeptidhidrazidot és —30 C° hőmérsékleten hozzáadunk 720 mg sósavat tartalmazó 10 ml tetrahidrofurán-oldatot, majd 0,84 ml izoamilnitritet és 5 perc keverés után 4,0 ml trimetilamint. Végül 12,0 ml dimetiMormamidban oldva 5,4 g heptapeptidet (1. példa 31 lépés) adunk a keletkezett azidoldatihoz. A reakcióelegyet egy óra hosszat —10 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. A reafceióelegy bepárlása után a maradékot vízzel eldörzsöljük, szárítjuk és a száraz nyersterméket 140 g szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etiilacetát-piridin-ecetsa,v-víz (60 : 210 : 6 : 11) elegyben. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 4,0 g védett deikapieptidet nyerünk. Rf1 0,15^0,20. ' 10 15 20 25 ;so S5 40 45 50 SQ eo D
