155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
15 155254 16 mint 0,0©8 ml (0,68 mmól) trietilamint. A raafacióelegyet állni hagyjuk 48 órán át, majd éterrel kicsapjuk, eitromsawal eldörzsöljük, szárítjuk. A csapadékot etilaoetát-piridin-ecetsav-víz (80 : HO : 3 :5,5) elegylben kromaitografáljuk szilikagél oszlopon, Végül 848 mg (74%) védett dekapeptidet kapunk. Op.: 1187—170 C°. RÍ2 0,30^-0,36. Rf 5 0,il0^0,ili8. C86Hi3902 /JN 21 i(18Ql,14). 26. lépés: Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Argl(N02)-Arg(NO2 ). -Pro-Val-LysíBOO-Val-TyríBuO-Pro-OPCP '(15—24) 2,0 ml idimetilformamidban feloldunk 841 mg (0,453 mmól) védett dekapeptidet (1. példa 25. lépés), 145 mg (0,545 mmól) pentaklórfenolt és jeges víz 'hűtés mellett hozzáadunk 144 mg (0,695 mmól) dieiklohexilkarbodiimidet. A reakcióelegyet két napon át állni hagyjuk, majd a kivált karlbaimidot kiszűrjük, dimetilíormamiddal mossuk, a dimetilformamid oldatokat bepároljuk, s a maradék tömény acetonos oldatát szilikagél oszlopra öntjük. Az oszlopot acetonnal mossuk. A nem reagált sav az oszlopon megkötődik. Az észter acetonos oldatát bepároljuk, éterrel eldörzsöljük és mossuk, szárítjuk. 704 mg (74%) védett dekapeptid aktívésztent nyerünk. Rf2 0,80—4)87. R 3 0,24— 0,33. Rf5 0,79—10,06. C9 2H 13 8024N 21 Cl5 .(2099,48). 27. lépés: Lys!(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val--LysiíBOci-Val-TyrfBuO-Pro-AspííOBuO-Ala-Gly-Glu(OBuOJ Asp(OBu í )-'Gln-Ser-Ala-Glu(OBuí )-Ala-;Ph.e-Pro-iLeu-Glu(OBu O-Phe-OBu' I(1I5--39) 600 mg (0,286 mmól) védett pentadelkapeptidet (1. példa 13. lépés) 20 ml ecetsavban hidrogénezünk csontszenes palládium jellenlétélben. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljufc és éterrel eldörzsöljük, majd szűrjük, szárítjuk. 490 mg (85%) szabad N-terminálisú pen ta dekapeptidet kapunk. Rf' 0,50'-^0,5(5. Rf5 0,215—0,13(0. Az anyagot (0,242 mmól) feloldjuk 515 mg (0,242: mmól) védett dekapeptid aktív észterrel (1. példa 212. lépés) együtt 3,0 rnl dimetiliformaimidban és 48 órán át 50 C°-on reagáltatjuk: A reafccióelegyet éterrel eldörzsöljük, majd a nyersterméket háromszor átoldjuk 70%-os. vizes metanolból, s végül acetonnal eldörzsöljük: 460 mg (50%) védett penitaközapeptidet kapunk. Rf2 0,42—0,47. Rf 5 0,55^0,00. A védett vegyületből 366 mg (0,0965 mmól) anyagot — csontszenes palládium jelenlétében — 100 ml 80%-os ecetsavban hidrogénezünk. A reakció végén (csak Rfl 0,2S^ J 0,27 folt látható a kromatogrammon) a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljulk. A párlási maradékot jeges víziben hűtjük, majd 10 ml 5 0,1 n sósavval eldörzsöljük, 10 ml 15%-os konyhasó-oldatot adunk hozzá és szűrjük, hideg vízzel mossuk, szárítjuk: 2(215 img (63%) pentakozapeptidtriklórlhidrátot kapunk. Rf1 0,23^0,27. Rf7 0,(34—0,40. 10 Ci73 H2 8 4'0 45 iN35iCl3 (3679,65). 28. lépés: 15 Z-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OET (9—14) 4,95 g Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OET [R. Schwyzer és W. Rittel: Helv. Chim. Acta 44, 159 (11981)] tetrapeptidésztert etanolban oldunk 20 és csontszenes palládium jelenlétében a védő karfooíbenzoxi csoportot hidrogenolizáljuk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljulk. A maradék az N-terminálisán szabad, tetrapeptidészter (Rf1 0,40—0,50), 25 melyet feloldunk 7,5 ml dimetilforimamidban és az alábbi vegyes anhidridlhez adjuk: 7,5 ml dimetilformamidban oldunk 2,95 g Z-Try-Gly-OH dipeptidet [K. Hofimann, M. E. Woolner, G. Spühler és E T. Schwartz: J. Am. Chem. £0 Soc. 80, 1486 (1958)], hozzáadunk 1,05 ml trietilamint és —10 C° hőmérsékletre hűtve 0,99 ml kló'rszénsav-izobutilésztert. 15 perc keverés után adjuk a vegyes anhidridlhez a fenti amin-oldatot. Az egyesített oldatokat éjszakán át 35 állni hagyjuk, majd bepároljuk és a maradékot feloldjuk etilacetátiban. Az etilacetát_ -oldatot 0 C° hőmérsékleten mossuk híg sósav-oldattal, vízzel, 10%-os nátriumkarbonát oldattal és ismét vízzel, végül nátriumszulfáton 40 megszárítjuk és bepároljUk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. A nyers védett hexapeptiidésztert vízmentes etilacetátban forralással oldjuk, majd az oldat lehűtése során kiváló anyagot szűrjük, hideg vízmentes 45 etilacetáttal mossuk és szárítjuk. 5,25 g (77,5%) védett hexapeptidésztert kapunk. [«]20 D =—50° (c = l, etanolban). Rf3 0,13^0,212, Rf' 0,48— 0,59. Trifluoreoetsávas szolvolízis után Rf1 0,44-^0,50. 50 CíeHeíOnNg (905,04). Számított: C 611,05, H 7,13, N 12,4%. Talált: C 61,05, H 7,35, N 12,4%. 55 29. lépés: Z-Arg-Try-Gly-'Lysí(BQiC)-Pro-Val-Gly-OEt-fiCl (8—14) 60 3,5 g fent leírt hexapeptidészter védő karbobenzoxi csoportját etanol-oldátiban csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljuk, majd a reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A maradék olajat (Rfl 65 0,54—0,64) 1,33 g karbobenzoxí-L-arginin-klór-8
