155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
1552. 13 19. lépés: H-Tyr(Bu')-Pro-OH (2S3>~.24) 160 g Z-Tyi^BuO-OSu aktív észtert (1 .példa 5 18. lépés) 2 liter vízimentes dioxánibian, 50,3 g prolint és 36,7 g nátrium-hidrokarbonátot 1^5 liter víziben oldunk, majd a két oldatot összeöntjük és 2 órát szobahőmérsékleten kevertetjük. Ezután vákuumban kib. 1 literre bepárol- 10 juk és a maradékot 600 ml vízzel hígítjuk, majd 1 liter etilacetáttal kirázzuk. Elválasztás után az etilaeetátos oldatot 8%-os nátrium-hidrokaribonát-oldattal, vízzel mossuk. Az egyesített vizes oldatokat citromsavval pH 3-ra 15 savanyítjuk és a leváló olajat etilacetáttal kirázzuk, majd szárítás után az etilacetátot vákuumban ledesztilláljuk. A visszamaradó nyers karfoofoenziloxi-dipaptidet 2,,5 liter etanolban oldjuk, miajd csontszenes palládium jelenlété- 20 ben hidrogenolizáljuk. A katalizátor kiszűrése után az oldatot vákuumban bepároljuk. 99— 95 g (79—©3i%) amorf dipaptid marad vissza, amit víziből kikristályosítunk. 25 20. lépés: H-Val-Tyr(Bu')-Pro-OiH i(22—24) 250 ml vízmentes dioxánban feloldunk 21,5 g EO H-TyníBuO-Pro-OH dipeptidet (1. példa 19. lépés) és 9,05 ml trimetilamdnt, majd 17,9 g Z-Val-O&u aktív észtert adunk hozzá. A reakcióelagyet másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk és a ma- 35 radékot 300 ml 8%-os nátrium-ihidrokarbonát oldat és 150 ml éter keverékében oldjuk. A vizes fázist elválasztás után citromsavval pH 3-ra savanyítjuk és a kivált olajat kloroformmal kirázzuk. A kloroformot szárítás után le- 40 desztilláljuk. A nyers karboibenziloxi-tripeptidet 250 ml 80%-os ecetsavban oldjuk és csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljiuk. A katalizátor kiszűrése és az oldószer ledesztillálása után visszamaradó nyers tripeptidet 45 1,1 liter vízmentes metanolból kristályosítjuk át. Összesen 13,7 g (©2%) teriméket nyerünk. Op.: 134—1:36 C°. 21. lépés: Z~Lys{BO€)-OSu {211) 300 ml vízmentes dioxánban feloldunk 67,3 g 55 Z-Lys(BOC)-OH származékot és jegesvizes hűtés közben 20,4 g N-lhidroxiszuikcinimidet, valamint 37,0 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Miután 1 óirát hidegen, 3 órát szoibalhőmérsékleten állni hagytuk, a kivált diciklohexilk&riba- 60 midot kiszűrjük és a dioxános oldatot bepároljuk. A visszamaradt nyers terméket 350 ml vízmentes benzol és 250 ml petroléter elegyéből átkristályosítijuk. 59 g (70%) aktív észtert kapunk. Op.: 93—06°. 65 14 22. lépés: . H-Lysi(BOC)-Val-Tyr(BuO-Pro-OH {211—24). 600 ml dioxánban feloldunk 53,6 g Val-TyríBuO-Pro-OH tripeptidet (1. példa 20. lépés) és 17,2 ml trietilamiirtr és 59,1 g Z-Lysl(BOC)-OSu aktív észtert adunk hozzá. A reakcióélegyet 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk és a maradékot 800 ml etilaeetátlban oldjuk, vízzel, 10%-os citromsav-oldattal, vízzel kirázzuk. Az etilaeetátos oldatot szárítás után vákuumban bepároljuk, -majd a maradékot 1 liter 80%-os ecetsavban oldjuk és csontszenes palládium jelenlétéiben hidrogenolizáljuk. A katalizátor kiszűrése és az oldószer bepárlása után nyert nyers terméket 4,í2 liter vízmentes metanolból átkristályosítva összesen 59,5 g (73%) tetrapeptidet nyerünk. Op.: 1921—193 C°. 23. lépés: Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyri(Buí )-Pro-OH (20—24) 410 ml vízmentes dimetilformamidban rázogatás köziben feloldunk 41,0 g H-LySi(BOC)-Val-TyniBuO-Pro-OH tetrapeptidet (1. példa 22. lépés) és 8,6 ml trietilamint, majd 21,5 g Z-Val-OSu aktív észtert adunk hozzá. A reakcióelegy másnapig szobahőmérsékleten áll. Ezután vákuumban bepároljuk, a maradékot 800 ml kloroformban oldjuk, majd 10%-os citromsav-oldattal, vízzel kirázzuk és szárítás után a klroformot ledesztilláljuk. 51,0 g (93%) védett pentapeptidet kapunk a bepárlási maradék petroléteres eldörzsölésével. Op.: 123—126 C". 24. lépés: H-Val-LysCBOCKVal-TyriíBuO-Pro-OH (20—24) 30 ml 80%-os ecetsaviban feloldunk 1,4 g (1,565 mmól) védett pentapeptidet (1. példa 23. lépés) és csontszenes palladium jelenlétében hidrogenolizáljuk. A rekació végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A párlási maradéklhoz 10 ml metanolt adunk, hagyjuk kristályosodni. A kristályokat kiszűrjük, hideg metanollal mossuk. 0,786 g (66%) szabad pentapeptidet kapunk. Op.: 202^-205 C. C39 H 6 *O d N 6 (760,95). . 25. lépés: Z-Lys{B0C-Ly9(B0C)-Arg{NO2 )-Argí(NO 2 )--PTO-Val-LysíBOiCyVal-TyrííBuO-Pro (15—24) 50 C°-on feloldunk 3 ml dimetiMormai midban 481 mg (0,63 mmól) pentapeptidet (1. példa 24. lépés) és 841 mg {0,62, mmól) védett pentapeptid aktív észtert (1. példa 17. lépés), vala-7
