155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
155254 15—39 pentakozapeptid részekből kialakított, alkalmasan védett komponensek felhasználásával. H^Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 -Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-JArg-Arg-Pro-Val-11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 -Lys-Val-Tyr-Pro-Asp-Ala-Gly-Glu-Asp-GIn-21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 -Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OH 31 32 33 34 35 36 37 38 39 A találmány szerinti eljárásban felhasználásra kerülő 1—14 tetradekapeptid-komponenst a II és a 15—39 pentakozapeptid-kamponenst a III képlet adja meg: OY X' X-Ser-TyrnSer-Met-Glu-His-Phe-Arg-Tyr-Gly-X / -Lys-Pro-Val-Gly-Q II X X' X' X H-Lys-Lys-Arg-Árg-Pro-Val-Lys-Val-Try-Pro-OY OY OY OY / / / / -Asp-Ala-Gly-Glu-Asp-Gln-Ser-Ala-Glu-Ala-OY -Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OY III ahol X és Y hasonló módon eltávolítható védőcsoportokat, pl. terc.butiloxikarbonil- és tercbutil-csoportot jelentenek' Q pedig hidroxil-csoportot vagy a peptidkémiában általánosan használatos bármilyen karboxil-csoportot aktiváló szubsztituenst, pl. azid-, nitrofenoxi- vagy klórfenoxi^csoportot jelent, X' guanidino-csoport védésére szolgáló szubsztituenst, pl. nitrocsoportot jelent, de jelenthet guanidino-csoportot védő protont is. Jelen leírásban az aminosav rövidítésekhez zárójelben vagy kötőjellel csatolt jelölések funkciós csoportokra, illetőleg azok védőcsoportjaira utalnak az alábbi részletezés szerint: Z— = karbobenziloxi-csoport :(C6 H 5 CH 2 OCO—); BOC— = tercbutiloxikarbonil-csoport [i(CH3)3l OOCO—]; — Bu' = terc.butil-csoport [Q(CH3 ) 3 ]. A találmány szerinti eljárás értelmében úgy járunk el, hogy egy II képletű tetradekapeptidkomponenst és egy III képletű pentakozapeptidkomponenst a peptidkémiában ismert kapcsolási módszerek (pl. azid, vegyes anlhidrid, aktív észter- karbodiimid stb.) bármelyikével kondenzálunk. Igen előnyösnek találtuk azt a mód-10 15 20 25 35 40 45 50 55 60 65 szert, amikor a kondenzációt valamilyen hídroxi-vegyület> pl. pentaklórfenol és karbodiimid, így diciklohexilkarbodiimid jelenlétében végezzük. A II képletű tetradekapeptid és a III képletű pentakozapeptid kapcsolásánál kapott védett nonatriakontrapeptid védőcspportjainak lehasításával funkciós csoportjain szabad termékhez jutunk, mely tisztítás után önmagában vagy sói alakjában, fémsókkal képezett komplexei, esetleg zselatinnal vagy emberi szérumfehérjékkel képezett adduktumai, vagy redukáló cukrokkal kialakított kondenzátuímai formájában alkalmazható. A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagaként használt II és III képletű komponensek szintézisére önmagukban ismert védőesoportkombinációk és kapcsolási módszerek használhatók. A peptidszintézis általános elveinek megfelelően célszerű a szintézis végén enyhe savas hidrolízissel eltávolítható védőcsoportokat alkalmazni (pl. amino-védésre terc.butiloxikarboml-esoportot, karboxil-, ill. hidroxil-védésre terc.butilészter- vagy terc.butiléter-csoportokat), de az intermedierek előállításánál előnyösen használhatjuk a karbobenzoxi-, ill. p-klór-karbobenzoxi-csoportot és az arginin guanidino-csoportjának védésére a nitro-csoportot is. A szintézis természetesen elvégezhető külön védőcsoportot nem tartalmazó' csupán protonált guanidino-csoportú argininnel is. A peptidkötések kialakítására a vegyes anhidrides, aktív észteres vagy karbodiimides módszereket alkalmazhatjuk- ha az aktiválandó komponens acilaminosav vagy olyan acilpeptid, melynek C-terminális aminosava prolin vagy glicin. Minden más esetben, ahol az aktivált aminosav racemizálódásával kell számolni, előnyös az azidos módszert alkalmazni, izolált vagy nem izolált aziddal, vizes közegben vagy szerves oldószerben. A II általános képletű 1—14 védett tetradekapeptid-komponens szintézise során célszerűen úgy járunk el, hogy az irodalomból ismert Z-Lysi(BOC)-Pro-Val-jGly-OiC2H 5 tetrapeptidet előbb a Z-Try-^ly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-'aC2 H5 hexapeptiddé, majd védett argininnel való kapcsolás és a C-, illetőleg N-terminális védőcsoportok eltávolítása után a H-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OH heptapeptiddé alakítjuk át. Ezt előbb Z-Clu.(OBuO-His-Phe-N3 -dal, majd a keletkezett dekapeptidet az N-terminális védőcsoport eltávolítása után BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-N3 -dal acilezzük. így a OBu' / BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Pbe-Arg-Try-BOC / -Gly-^Lys-Pro-Val-Gly-OH képletű 1—14 tetradekapeptid-komponens keletkezik. 2
