155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
155254 6 A 15—39 pentakozapeptid szintézisének egy előnyös módja szerint az ismert H-Glu^OBu')-Ala-Phe-Pro-OH és Z-Ser-Ala-N3 kondenzálásával és a keletkezett vegyület hidrogenolízisével az új H^Ser-Ala-Glu(OBuf )-Ala-Phe-Pro-OH hexapeptidet állítjuk elő, melyet az ugyancsak új Z-Gln^Ser-Ala-Glu(OBuf )-Ala-Phe-Pro-OH heptapeptiddé alakítunk. A védett heptapeptid és az ismert H-Leu-Glu(OBu')-Phe-OBu? kapcsolásával az új Z-Gln-Ser-Ala-Glu(OBu^Ala-Fhe-Pro-Leu-Glu'(OBuf )-Phe-OBur dekapeptidhez jutunk. Ezt előbb védett aszparaginsavval -majd védett glutaminsawal acilezzük és így az új undeka- ül. dodekapeptidet állítjuk elő. Ezt a dodekapeptidet az új Z-AspCOBuO-Ala-Gly-OH tripeptiddel kapcsoljuk, amikor egy új pentadekapeptid keletkezik, amelyet a Z-Lys!(BOe)-Lys(B0iC)-Ar@(NO2 )-Pro-OR i(R = p-nitrofenil vagy pentaklórfenil gyök) és H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr!(Buí )-Pro-OH pentapeptidek kondenzációjából származtatható új védett dekapeptiddel acilezünk. Az így előállított védett pentakozapeptid hidrogenolízisével kapjuk a III képletű, eddig ismeretlen 15—39 pentakozapeptid-származékot, amelyben X = BOC, Y = Bu' és X' = H. Eljárhatunk oly módon is, hogy a Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(BuO-Pro-OR' pentapeptid (R' = = aktiváló gyök, pl. szukcinimid) (—Su) és az új H-AspíOBuO-Ala-Gly-OH tripeptid reakciójából nyert új oktapeptiddel kapcsoljuk a fent említett dodekapeptidet, amikor az új Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyri(Buí )-Pro-.Asp(OBu í )^Ala-HGly-GluíOBuO-AspíOBuO-Gln^Ser^Ala-GluíOBuO-Ala-Pbe-Pro-Leu-GluCOBuO-Phe-OBuf ikozapeptid keletkezik. Ennek N-terminális védőcsoportját eltávolítva és a már említett pentapeptiddel kapcsolva az előbb ismertetett védett pentakozapeptidet nyerjük, melyet az előzőkben megadott módon, hidrogenolízissel alakítunk át a kívánt III i(X = BOC, Y = = Buf, X' = H+) képletű .15—139 komponenssé. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg.* *A példákban megadott RF^értékeket szilikagél-rétegen végzett kromatográfiával állapítottuk meg, a számindexek az alábbi oldószereket jelentik: 6:11 6:11 6:11 60:20:6:5,5 30:20:6:214 1. Etilacetát-piridin-jégecet-víz 60 2. Etilacetát-piridin-jégecet-víz 120 3. Etilacetát-piridin-jégecet-víz 240 4. Kloroform-metanol 90:10 5. Kloroform^metanol 85:15 6. Kloroform^metanol 80:20 7. Etilacetát-piridin4iangyasav-víz 8. n-Butanol-piridm-jégecet-víz 1. példa: 1. lépés: Z-Ser-Ala-Glu(OBuO-Ala-Phe-Pro (31—36) 3,6 g ,(11,1 mmól) Z-iSer-Ala-,N2 H 3 védett dipeptidhidrazidot ,[J. I. Harris, J. S. Fruton: J. Biol. Chem. 191, 143 <19i51)] szuszpendálunk 36 ml dimetilformamidban és —30 C°-on hozzáadunk 5,55 ml 6 n sósavat, majd a hőmérsékletet lassan emeljük. A szuszpendált anyag kb. —20 C°-on oldódik fel. Ezután az oldatot —30 C° alá hűtjük és 2,2 ml 5 mólos nátriumnitritoldatot csepegtetünk be. 15 percig —20 és —30° közötti hőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, majd hozzáadjuk az amino-komponens vizes oldatát: 20 ml vízben, mely 1,3.3 ml (9,5 mmól) trietilamint is tartalmaz, 'feloldunk 4,92 g Glu(OBuf )-Ala^Phe-Pro szabad tetrapeptidet [S. Bajusz, T. Lázár: Acta Chim. Hung. 48, 111 (19,66)]. Az oldatok egyesítése után a hőmérsékletet lassan hagyjuk 0 C°-ra emelkedni és állni hagyjuk éjszakán át. Az oldatot citromsavval kb. pH 3-ra savanyítva a keletkezett védett heptapeptid kiválik: 5,165 g (73,5%). Op.: 172—173 C°. Rí2 0,23—0,33, Rfi 0,65—'0,75. C4oH54 Oi2JSr e (810,88). 2. lépés: Ser-Ala-Glu(OBuO-Ala-Phe-Pro (31—36) Feloldunk 5,8 g (7,15 mmól) védett hexapeptidet (1. példa 1. lépés) 100 ml 80%-os ecetsavban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció előrehaladását kromatográfiával követjük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, egy ízben metanolt is ledesztillálunk a maradékról. A metanolos oldatból az anyag kristályosan kiválik. A sűrű szuszpenziót éterrel hígítjuk, a kristályokat szűrjük, éterrel 'mossuk, szárítjuk. 4,3 g ,(89%) szabad hexapeptidet nyerünk, Op.: 200^202 C°. Rf1 0,15^0,20. 3. lépés: Z-Gln-Ser-Ala-GluCOBuO-AIa-Phe-Pro (30—36) 13,0 ml piridinben 50 C°-on feloldunk 4,3 g (6,35 mmól) szabad tetrapeptidet (1. példa 2. lépés), 0,45 ml (6,35 mmól) trietilamint, valamint 2,81 g (7,0 mmól) karbobenzoxi-glutamin-p-nitrofenilésztert. A reakcióelegyet állni hagyjuk egy napon át, majd a géles anyagot éterrel eldörzsöljük, majd citromsavval is eldörzsöljük, végül metanolból kristályosítjuk: 4,i65 g (78%) védett heptapeptidet kapunk. Op.: 188—190 C°. Rfi 0,45—0,62. C45 H 62 0 14 ,N 8 (939,01). 55 4. lépés: Z-Gln-Ser-Ala-Glu(OBu! )^Ala^Phe-Pro-Leu-GlutOBu^-Phe-OBu' (30—39) 60 3,96 g (6,06 mmól) Z-Leu-Glu(OBu? )-Phe-QBu< [S. Bajusz, T. Lázár: Acta Chim. Hung. 48, 111 (1906)] védett tripeptidésztert 50 ml metanolban oldunk és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végén a 65 katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 3
