154936. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
154936 15 16 Az oldatot szokásos módon szűrjük, ampullákba letöltjük és 120 C°-on 20 percig autoklávhan tartjuk. Az oldat sterilizálása utáni pH-értéke 3,6. 14. példa: A következő komponensekből szuszpenziót készítünk: Liz1 7.i8-/ 6 > i-24_í[ íor tii to t r0 pi nJ hexaacetát ZnCl2 Na2 HP0 4 -i2H 2 O NaCl Benzilalkohol NaOH ad pH 8,3 Desztillált víz 15. példa: 1,0 5,25 1,05 2,0 10,0 mg mg mg mg mg ad 1,0 ml 1,0 mg 6,30 mg 1,2-6 mg 1,5 mg 10,0 mg d 1,0 ml Az alábbi komponenseket tartalmazó szuszpenziót készítünk: Lizi'.is-^i-M-kortikotropin-hexaacetát ZnCl2 Na2 HP0 4 • 2H2 0 NaCl Benzilalkohol NaOH ad pH 8,3 'Desztillált víz 16. példa: 0,5 mg Liz«.1 8-^i-2^kortikotropin4iex.aacetát, 5,25 mg ZnCl2 , 1,05 mg Na 2 HF0 4 .2H 2 0 és 2,0 mg NaCl komponensekből 3,0 pH-értékű 0,5 ml sósavat oldatot állítunk elő. Ezt az oldatot 10 mg benzilalkohol 0,5 ml vízben képzett oldatához adjuk, amely annyi nátriumhidroxidot tartalmaz, hogy a szuszpenzió pH-értéke 8,3 legyen. 17. példa: . - • 5 mg közepes (39 600) mólsúlyú poli-L-glutaminsavat 5 ml 0,1 n nátriumhidroxidban feloldunk. Az oldatot leszűrjük, 2,5 mg Liz17 ' 18 -/S1_2/l -kortikotrojpin-ihexaaicetátot adunk hozzá, majd ecetsavval vagy sósavval 4 pH-értékre állítjuk be és vízzel 10 ml-re feltöltjük. Ekkor ' a poli-L-'glutaminsav-Liz17 ' 18 -/ 3 1 "" 24 -kortikotropin-komplex finom eloszlásban kiválik. A szusz-, penzió ml-ként komplexvegyület formájában 0,5 mg poli-L-jglutaminsavat és 0,25 mg Liz17 > 18 -/91_24 -kortikotropint tartalmaz. 18. példa: 2,0 g közepes .(tob. 39 600) mólsúlyú poli-L-glutaminsavat kb. 5,7 ml 10%-os nátriumhidroxidban feloldunk, hogy az oldatnak 7,4 pH-értéke legyen. Ebben az oldatban 4,0 mg Liz17' 18 -^-1 ~ 24 -kortikotropin-he'xaaeetátot és 0,2 10 15 20 25 £0 35 40 45 50 55 60 mg mertiolátot feloldunk, majd az oldatot desztillált vízzel 10 ml-re -kiegészítjük. Az oldatot sterilen szűrjük. Az oldat ml-ként az aláhfoi komponenseket tartalmazza. Liz17 > 18 -/? 1_24 -kortikotropin-ihexaacetát 4,0 mg Poli-L-glutaminsav 200,0 mg Nátriumhidroxid 7,4 pH-értékig Mertiolát 0,02 mg Desztillált víz ad 1,0 ml 19. példa: BOC-Ser-Tyj:-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-,Pro-Val-Gly-Ly(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 1160 mg BOC-Ser-Tyr-.Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH és 837 mg H-Lys (BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys!(BOC)-Lys (BOC)-Lys(BOC)-NH2 -ot .(előállítása a lajstromszámú, Cl—673 .alapszámú magyar szabadalomiban van ismertetve) 18 ml piridin, 2 ml víz és 0,95 ml 1 n sósav elegyében szuszpendálunk, majd 50 C°-on történő rövid keverés után 427 mg szilárd állapotú dieiklohexil-karbodiimidet adunk hozzá, a reakciókeveréket nitrogénnel átöblítjük és 3 óra hoszszat 50 C°-on keverésben tartjuk. Ezután mégegyszer az előbbivel azonos mennyiségű diciklohexil-karbodiimidet adagolunk, a keverést ismét '3 óra hosszat 50 C°-on folytatjuk, végül a reakciókeveréket éjjelen keresztül jégszekrényben állni hagyjuk. A kivált kristályos diciklohexil-karbamidot leszűrjük, 2:1 piridin-^víz eleggyel mossuk és a mosóoldattal egyesített szűrletet csaknem szárazra pároljuk. A maradékot 40 C°-ra történő felmelegítés közben 20 ml metanolban feloldjuk, a metanolos oldathoz 30 ml benzolt adunk, majd a nyers oktadekapeptidszármazékot 0 C°-on 100 ml petroléter beadagolásával pehelyszerű csapadék formájában leválasztjuk. A nyersterméket előtisztítás . céljaiból mégegyszer dimetiliformamid-etilacetát-petroléter oldószer rendszerből átoldjuk, végüí további tisztítás céljából Craig-féle elosztásnak vetjük alá 10:3:7:4 arányú metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid oldószerrendszerben és 200. elosztási lépésben (f ázistérfogat mindenkor 10 ml). Pufferként 28,5 ml jégecet + 19,25 g aímmóniumacetát 960 ml vízben kezelt elegyét használjuk. A tiszta védett oktadekapeptidamidot az 58—82 elosztási lépésből (súly maximum a 74-es számú kémcsőben- elosztási-együttható K = 0,59) oly módon izoláljuk, hogy az elosztási lépésekből kapott anyagot szárazra pároljuk, az ammóniumacetátot nagyvákuumban '40 C°-on elszublimáljuk, amikoris végeredményben fehér tiszta amorf por alakú termék képződik. A tiszta termék szilikagélen végzett vékonyréteges kromatogramos elemzése a következő 65 Rf-értekéket mutatja:
