154936. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
154936 17 18 •Rí ,(43C) Rí i(52) Rí (100) = 0,57 = 0,43 = 0,44 H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-jLys-Lys-Lys-INHyacetát (Lys17 ' 18 -/? 1-18 -kortikotropin-Lys 18 -amid) 516 mg védett oktadekapeptid-amidot 10 ml 90%-os trifluorecetsavban feloldunk, nitrogénnel átöblítünk, majd 30 percen keresztül :2ü—2í2 C°-on állni hagyunk. A reakciókeveréket ezután vízsugárszivattyúval elérhető vákuumban 25 C° fürdőhőmérsékleten kb. 2 ml térfogatra bepároljuk, ehhez 15 ml vizet adunk, mégegyezer bepároljuk, majd liofilizáljuk. Az oktadekapaptid-amid így kapott trifluoracetátját acetáttá alakítjuk át oly módon, hogy 5 ml víziben feloldjuk és gyengén bázisos acetátformájú ioncserélővel (például Merck Nr. II) töltött 15 mm átmérőjű és 12 om magas Oszlopon szűrjük. Az eluátumot 10 :ml térfogatra ibepároljuk, liofilizáljuk, majd nagyvákuumban 40 C°-on megszárítjuk. 382 mg kromatográfiai és elektroforetikus vizsgálatokkal egységes Lys17' 18 -/3^ _18 -kortikotropin-Lys 18 -amidot (acetát) kapunk fehér amorf por alakjában. A termék alumíniumoxidon végzett vékonyréteges kromatogramos elemzése a következő Rf-értékeket mutatja: Rf (52 A) Rf i(101) = 0,il3 = 0,34 Piapírelektroforetikus vizsgálatnál (16 Volt/ /Cm) 6,il pH-értéken (piridinacetát puffer) a termék 2 óra leforgása alatt 11,5 cm-t vándorol a katód felé. A termék hatását hipofízisüktől megfosztott patkányokon vizsgáljuk (Barthe, Desaulles et al.-féle módszer) és azt tapasztaljuk, hogy a vizsgált vegyület hatékonyságot mutat a /?1-18--kortikotropin-Arg18 -amidhoz képest. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás ACTH4iatású peptidek előállítására, azzal jellemezve, hogy az ACTH terminális amino-csoportjától számítva* Iß—,24 aminosav-gyökből álló ACTH-hatású peptidekről — amelyebben a 17- és 18-helyzetű arginin-gyökök lizin-gyökökkel vannak kicserélve és ame-10 15 20 25 30 35 40 45 50 lyekben legalább az a-amino-csoport és az oldalláncban álló amino-esoportok, valamint a terminális karboxil-csoport és adott esetben az oldalláncfoan álló karboxil-csoport védve vannak — a védőcsoportokat lehasítjuk és adott esetben, a kapott vegyületeket savas" addiciós sókká, származékokká vagy komplexekké átalakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként olyan peptideket alkalmazunk, amelyekben az a-amino-csoport és az (w^amino-icsoportok tereier-butiloxikarboml-csoporttal, a terminális karboxil-csoport és a glutaminsav y-karboxil-csoportja tereier-butilészter-csoportokkal van védve és a védőcsoportokat savas hidrolízissel lehasítjuk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az összes védőcsoportot trifluorecetsav segítségével lehasítjuk. 4. Az 1—4. igénypontok 'bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kündulóanyagként védett tetrakozapeptidet alkalmazunk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként az L-szeril-L-tirozil-L-szeril-L-metionil-L-^glutemil-L-lhisztidil-iIj-femlalanil^L-<argmil-L-triptofil-ghoil-L-liizil-L-prolil-iL-JValil-glicil-L-lizil-'L-li2il-IJ -{iizil-i L4izil-LHprolil-iLJvalil-L-lizil-Livalil^L-tirozil-L-prolin Összetételű védett tetrakozapeptidet használjuk. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a peptidek cinkkel vagy nehezen oldható sókkal vagy einkhidroxidokkal képzett komplexeit állítjuk elő. 7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás továbbfejlesztése adrenokortikotrop hatású készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy ACTH-jhatású, 18—24 aminosaiv-gyökből álló, a 17- és 18-Jhelyzetben arginin-gyökök helyett lizin-gyököt tartalmazó peptidekhez, ezek savas addiciós sóihoz, származékaihoz vagy komplexeihez önmagában ismert módon gyógyszerek előállításánál szokásos hordozóanyagokat, kötőanyagokat, siklatóanyagokat, ízesítőanyagobat stb., adott esetben pedig egyéb hasonló hatású hatóanyagokat adunk, és a készítményt tabletta, pilula, kapszula, ikiúp, emulzió, szuszpenzió, injekciós oldat stb. formában kikészítjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6807652. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 9
