154936. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
154936 10 nyerünk, amelynek olvadáspontja kb. 70—85 C°. Szilikagéles vékonyréteg-kromatograrnos elemzés alapján a következő Rf értékeket kapjuk: Rf (kloroform-metanol = 9 : 1) 0,19 Rf '(43A) 0,29 Rf 1(45) 0,52 3. • "Z • Liz(BOC)-Liz(BOC)-Pro-Val-Liz(BOC)-Val-Tir-Pro-OtBu 2,4 g Z-,Liz(BOC)-HLiz(BOC)-Pro-OH és 3,12 g H • ValHLÍ2j(BOC)-Val-Tir-Pro-OtBü keverékét 30 ml vízmentes kloroformban feloldjuk. Az oldathoz 0 C°-on 0,845 g diciklohexilkarbodiimidet adunk, további 1 óra hosszat 0 C°-on keverésben tartjük, majd 30 óra hosszat 25 C°-on állni hagyjuk. A kivált kristályos diciklohexilkarbamidot leszűrjük és kevés etilacetáttal mossuk. A szűrletíhez 190 ml etilacetátot adunk és a szerves fázist 0 C°-on háromszor 30—30 ml 3%-os borkősav oldattal extraháljuk a felesleges pentapeptid eltávolítása céljából. A borkősavas extrakció után a reakcióelegyet vízzel semlegesre mossuk, majd szárazra •bepároljuk. A lipofil szennyezések eltávolítására a száraz-maradékot 10 ml metanol és 20 ml etiiacetátelegyében feloldjuk, majd az oktapeptidet 120 ml petröléter hozzáadásával k'enőcsös massza alakjában kicsapjuk. A masszát yákuumlban 40 C°-on szárítjuk. Az így nyert 3,1 g nyersterméket végleges tisztítás céljából metanol-tpuffer-klorofonm-széntetraklorid oldószerrendszer felhasználásával (30 : 10 : 3 : 30) CraigHÍéle elosztásnak vetjük alá. Az elosztás során pufferanyagként a 2. alatti anyagot használjuk. 225 elosztási lépést és mindenkor 10 ml fázistérfogatot alkalmazunk. A kromatográfiásan egységes oktapeptid származékot a 6:5—96 számú elosztási lépések tartalmának szárazra való foepárlása és az ammótniumacetát elszublirnálása útján nagyvákuumban fehér amorf por alakjában nyerjük. (<*max = 78, K = 0,53). A termék olvadáspontja kb. 130—-140 C°. A termék vékonyréteg-kroniatogramos elemzése szilikagélen az alábbi Rf értékeket mutatja: Rf i(43A) 0,74 Rf {kloroform-metanol = 9 : 1) 0,54 Rf i(benzol-<aceton=il : .1) 0,33 4. H • Lia(BOC)-Liá(BOiC)^Pro-Val-Liz(BOC)-Val-Tir-Pro-OtBu 1,46 g Z-Liz(BOiC)-Pro-ValJlizi(BOC)-Val-Tir-Pro-OtBu-t 40 ml metanolban 300 mg 10%-os palládiumos aktívszén hozzáadásával rázólomfoikiban széndioxid-abszorpció köziben hidrogénezünk. A hidrogénfelvétel 10 perc után befejeződik. 1 óra eltelte után a 'katalizátort leszűrjük, a metanollal átöblítjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Ekkor kvantitatív hozammal a kromatográfiásan egységes dekarbobenzoxilezett oktapeptid származékot nyerjük, fehér amorf por alakjában. A' termék olvadáspontja kb. 110—120 C°. A termék vékonyréteg-kromatogramja szilikagélen a következő Rf-ér tekéket mutatja: '• ••• 5 Rf (43A) 0,53 Rf (kloroform-metanol == 9 : 1) 0,34 5; Z • Liz(BOC)jPro-Val-Gli-Liz(BOC)-Liz(BOC)-Liz(Bbe)-Liz(BOG)-Pro-Val-Liz(BOC)-Val-10 -Tir-Pro-OtBu 1,98 g Z-Liz(BOC)-Pro-Val-Gli-Liz(BOC)-Liz(BOC)-JSTHNH2 -ot 1214 242 számú német szabadalom 22 ml vízmentes dimetilformamidban 15 feloldunk. Az oldathoz —2-5 C°-ra való lehűtés után keverés közben először 3,4 ml 2,115 n sósavat, majd 0,37i8 ml 5 n nátriumnitrit oldatot adunk. Az átlátszó oldatot —10 C°-on 15 percig tövábbkeverjük, majd a fentiekben leírt 1,313 g 20 oktapeptid származék 4 ml dimetilformamidban képzett és —5 C°-ra lehűtött oldatával elkeverjük. Az oktapeptid származékot 1 ml dimetilfonmamiddal utánöblítjük, majd az elegyhez —5 C°-on lassan 1,05 ml trietilamint folyatunk. 25 A reakcióelegyet még 30 percig keverésben tartjuk, majd 15 óira hosszat 0 C°-on állni hagyjuk. Állás után viszkózus olaj képződéséig az elegyet betöményítjük, végül 20 ml vízzel kenőcsös masszát csapunk ki. A kenőcsös masz-S0 szát 20 ml metanolban melegítés közben ismét feloldjuk, rnajd a péptidet 30 ml víz hozzáadásával ismét kicsapjuk. 0 C°-ra való hűtés és eldörzsölés után porszerű szuszpenziót nyerünk, amelyet szűrünk, vízzel mosunk és szá-35 rítunk. Ezt a nyersterméket tisztítás céljából 60 : 20 : 3 : 60 arányban összetett metanol-pufferanyag^kloroform-széntetraklorid oldószerrendszer alkalmazásával Craig-féle elosztásnak vetjük alá. A pufiferanyag a 2. alatti anyaggal 40 megegyezik. Mindenkor 20 ml-es fázistérfogatokat alkalmazunk. 218 elosztási lépés után a 105—1134 elosztási lépések tartalmát (/j-max = 121, K = 1,25) szárazra bepároljuk és az ammóniumaoetátot nagyvákuumiban elszulblimáljuk. Ek-45 kor fehér, amorf por alakjában kroimatográfiailag egységes, védett csoportokat tartalmazó tetradefcapeptidet nyerünk, amelynek olvadáspontja kb. 1810—4.90 C°. A termék vékonyréteg-kromatogramos elemzése szilikagélen az 50 alábbi Rf-értékéket mutatja: Rf (43A) 0,80 Rf (kloroform-metanol == 9 :1) 0,49 55 6. H-Liz(BOC)^Pro-Val-Gli-.Lizi(BOC)-Li2(BOC)-Liz(BOC)-Liz(BOC)-Prö-Val-Liz(BOC)-Val,t Tir-Pro-OtBu • 60 1,66 g Z-Liz)(BOG)-Pro-Val-Gli-Liz(BOC)-Liz(BOC)-Liz!(BOC)-Liz(BOC)-Pro-Val-Liz(BOC)-Val-Tir-Pro-OtBu-t 40 ml metanolban oldunk és 300 mg 10%-os palládiumtartalmú aktívszénnel szokásos módon hidrogénezünk. A hid-65 rogénezett elegy szárazra való bepárlásánál köz-5
