154936. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására

154936 8 felsorolt nehezen oldható fémvegyületek, mint cinKoszfátok, oinkpirofoszfátdk, vagy cinkhidroxidok. Az új peptidek nyújtott hatékonyságának kialakítása céljából azokat az aminosavak poli- 5 merjeivel vagy kopolimerjeivel. reagáltatjuk. Ez utóbbiak közülazok jönnek számításba, amelyek a túlnyomó résziben savas jellegű a-aminosavaiklból, mint L-, D- vagy D,L-konfigurációjú glut aminsavakból, vagy aszparaginsavból 10 vannak felépítve. A nevezett polimerek vagy kopolimerek az oldalláncban szabad karboxil-csoportokat tartalmaznak, míg terminális karboxil-csoportjai szabadok vagy funkciós származékokká vannak átalakítva. A funkciós szárma- 15 zékok közül az észter-csoportokat, vagy helyettesítetlen vagy szénhidrogén-gyökökkel, főként rövidszénláncú alkilcsoportokkal szubsztituált amid-«soportokat soroljuk fel. A polimerek molekulasúlya 1000 és 100 000, előnyösen 2000— 20 •16 000 közötti érték lehet. A készítmények adagolásra való előkészítésénél célszerűen vízoldiható, fiziológiásán elviselhető sókat, pl. nátrium- vagy ammóniumsót vagy valamely szerves bázissal, mint trietil- 25 aminnal, prokainnal, dibenzilaminnal vagy más tercier nitrogénbázissal képzett sót használunk. Az alkalmazott polimerek ismeretesek vagy ismert módszerekkel, pl. M. Idelson et al., J. Am. Chem. Soc. 80, 4631 (1958) cikkben közölt 30 eljárással állíthatók elő. Az előállítást pl. úgy végezhetjük, hogy glutaminsav-a-karbonsavanhidrid-Y-benzilésztert vagy -terciernbutilésztert dioxános közegben ammóniával, vagy valamely aminnal meghatározott mólviszonyok, pl. 100 : 1 35 arányban (a kívánt polimerizáeiófoktól függően) reagáltatjuk és a polimerizáció befejezése után a védő-csoportokat lehasítjuk, éspedig a benziloxi-csoportot jégecetes közegben hidrogénlbromiddal, a tereier-butiloxi-csoportot pedig tri- 40 fluorecetsavval hasítjuk le. Egységes, meghatározott lánchosszúságú polimerek előállítása céljából oly módon is eljárhatunk, hogy a polimereket a peptidkémiában ismert módszerekkel (karbodiimides-, azides-módszer stb.) épít- 45 jük fel. A polimereknek a gyógyászati készítményekben alkalmazott koncentrációja az illető só oldhatóságától és viszkozitásától függ. A polimer a készítményekben oldott és injektálható álla- 50 pótban kell hogy jelen legyen. Az adrenokortikotrop4iatású peptideknek a készítményben való koncentrációját úgy állítjuk be, hogy a készítmény .1 ml-e pl. 10—15 I.E. értékű legyen. * 55 A találmány szerinti eljárás részleteit a következő példák kapcsán szemléltetjük: A .példákban alkalmazott vékonyréteg-kromatogramos rendszerek jelölésének magyarázata a következő: 60 43A rendszer: tercier-amilalkohol-izopropanol-HVÍZ (100 : 40 :10). 45 rendszer: szekunder-butanol-3%-os vizes ammónia (100 : 44). 65 100 rendszer: etilaeetát^piridin-jégecet-víz (62:21:0:11). 101 rendszer: n-butanol-piridin-jégecet-víz (30/:/20 : 6 : 24). A példákban az alábbi rövidítéseket használjuk: Z = karibolbenzoxi, BOC = terc.butiloxi-karboni'l, OtBu — terc.butiloxi. 1. példa: 1. Z-Liz (BQC)-Liz(BOC) • NBNH2 10 g Z-iLi2(BOC)-Liz(BOC)-OCH3

-at (amelyet Z • Liz(BOC)-OH+H • Liz(BOC)-OCH3

reakciókomponensekből dieiklohexilkaitxjdiimid segítségével állítottunk elő) 160 ml metanolban oldunk és az oldathoz 7,8 ml hidrázinhidrátot adunk. Az átlátszó oldatot 24 óra hosszat 25 C°^on állni hagyjuk, majd eredeti térfogatának kb. 1/3-ára bepároljuk. 200 ml víz hozzáadása után olajos csapadék válik ki, amely lehűtésre és dörzsiölésre megszilárdul és porítiható. A nyersterméket lenuccsoljuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Ezután metanol-etilacetát-ipetroléterelegyből átkristályosítunk, amikoris a nyert tisztított termék olvadáspontja 118—119,5 C°. Szilikagéles-vékonyréteg lemezeken a következő Rf-értékeket kapjuk: Rí <43A) 0,40 Rf (kloroform-metanol = 9 : 1) 0,75 2. Z • Liz(BOC)-Liz(BOC)-Pro-OH 1,87 g Z • Liz:(BOC)-Liz(BOC) • NHNH2

-ot 15 ml frissen desztillált dimetilformamidban feloldunk, majd az oldatot —2:5 C°-ra lehűtjük. A lehűtött oldathoz lassan először 2,07 ml 4,35 n sósavat, végül 0,66 ml 5 n nátriumnitrit oldatot csepegtetünk. Az elegyet —10 C°-on 10 percig keverésiben tartjuk, majd 4,2 ml 2:1 arányú dimetiiformamid-víz-elegyben feloldott 692 mg L-prolin oldatot adunk hozzá. Végül —10 C°-on a reakcióelegyhez 1,82 ml trietilamint csepegtetünk és az elegyet éjjelen át 0 C°-on, majd további 2 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Állás után az elegyet nagyvákuumban fcb. 4 ml térfogatra bepároljuk és a ragacsos maradékhoz 25 ml vizet adunk. A vizes elegyet 0 C°-ra lehűtjük és eldörzsöléssel pontjuk. A porított anyagot lenuccsoljuk, kevés vízzel mossuk, majd nagyvákuumban 40 C°-on szárítjuk. A nem kristályosítható nyerstermék tisztítása céljából azt Craig-féle többszörös elosztással 35 : 13 : 15 : 15 arányú metanol-puff er-kloroform-széntetraklorid oldószerrendszerben (puffer = 28,5 ml jégecet + 19,25 g ammóniumacetát 960 ml vízben) mindenkor 10 ml-es fázistérfogat felihasználásával tisztítjuk. 220 lépés után a 49—73 elosztási elemből (Pmax = 61, K = 0,39) szárazra való bepárlás és az ammóniumacetát elszublimálása útján kromatográfiásan tiszta, azonban amorf tripeptid származékot 4