154859. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dekapeptidek előállítására az adrenokortikotrop hormon molekula első tíz aminosav-gyökének szekvenciájával a molekula N-végződésétől számítva
154859 13 14 sékleten és 24 órán át 0 C°-on állni hagyjuk. A képződött csapadékot leszűrjük, megszárítjuk, és metanol-etilacetát 1 : 5 arányú elegyéből kristályosítjuk. Ilyen módon 1,3 g hidrazidot nyerünk {termelés: 68%); olvadáspont 164—166 C°; [a]D = —42,6° metanol-víz 1 : 1 arányú elegyében. 5. ,,Védett''~2-D-Tyr-7-D-Phe-dekapeptid A 4. lépés szerinti eljárással előállított 550 mg hidrazidot 5 ml dimetilfonmamidban oldunk. Az oldatot —20 C°-ra hűtjük, majd 2,25 ml 1 n sósavat adunk hozzá. Ezt követően 0 C°-on 0,06 g nátriumnitrit 1 ml vízzel készített oldatát adjuk az elegyhez, és 8 percen át keverjük, majd 2 ml 2,5 n káliumhidrogénkarbonáttal semlegesítjük. A keveréket kétszer 15 ml etilacetáttal extraháljuk; az extraktumokat vízzel mossiuk, 5 ml-re bepároljuk, és az 1. .példa 6. lépésében említett 750 mg H-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Arg-T;ry-Gry-OH 20 ml dimetilfonmamid és 0,15 g trietilamin keverékével készített oldatához adjuk. Az oldatot 40 órán keresztül 0 C°-on állni hagyjuk, .majd 7,5 ml-re bepároljuk és vízzel 150 ml~re hígítjuk. A csapadékot szűrés után nagy vákuumban 35 C°-on szárítjuk. így 450 mg BOC^Ser-D-Tyr-Ser-Met-Gl.U)(OtBu)-HJs-D-Ehe-Arg-Try-Gly-OH összetételű védett dekapaptidet kapunk. Rf = 0,23 vékonyrétegkromatográfiásan Al2 0 3 ~on mérve, etilacetát: piridin: ecetsav: víz = 60:20: :6:11 futtatórendszerben. A védő csoportokat tirifluorecetsav :víz 10 : 1 arányú elegyével lehasítjuk, és a keletkező dekapeptid-trifluoiracetátot acetát formájú ioncserélővel kezeljük. így 305 mg 2-D-Tyr-7-D-Phe-dekapeptidet kapunk. Rf = 0,58 Si02 -on 100:15:35 arányú n-JbutanoJ:eeetsav :víz rendszerben. 3. példa: l-D-Ser-2-D-Tyr-7^D-Phe-dekapeptid előállítása. 5,1 g BOC-D-3er-OH diciklohexilamin-sóból és 3,1 g H-D-Tyr-OMe-HCl-ből 3,8 g dipeptidésztert nyarunk; olvadáspont 123—126 C°; [Ű]D = +1° metanolban. Ebből 3,2 g megfelelő hidrazidot kapunk; olvadáspont 196—200 C° bomlással; [a]D = +17,3° ecetsavban. A BOC-D-Ser-D-Tyr-Ser-Met-OMe tetrapeptidet gyantaszerű termék formájában kapjuk 3,0 g terme' léssel, amelyből további tisztítás nélkül 2,7 megfelelő hidrazidot kapunk. Ecetsavas közegben perklórsavval végzett egyenértéksúly-titrálás só alakjában kötődött szabad hidrazinnyomok jelenlétére mutat. A nyert BOC-D-Ser-D-Tyr-Ser-Met-N2 H 3 800 mg-ját 1,1 g az 1. példában leírt H-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Arg-Try-Gly-OH hexapeptiddel kapcsoljuk. így 610 mg Védett dekapeptid: BOC-D-SarnD-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBiu)-His-D-Phe-Arg-Try-Giy-OH keletikezik, amelyből a védő csoportok lehasításával l-D-Ser-2-nD-Tyr-7-jD-Phe-dekapeptidet kapunk. Termelés: 397 mg. 5 4. példa: 7-D-Phe-8-D-Arg-deka.peptid előállítása. 9,24 g BOC-D-Arg(N02 )-OH-t, amelynek ol-10 vadáspontja :108—J.10 C° és [a]D = +7,0°, dimetilfonmamidban kapcsolunk anhidrides módszerrel 11,0 g H-Try-Gly-OMe monoacetáttal. így 6,5 g BOC-D-Arg(N02 )-Try-Gljr-OMe keletkezik (termelés 40%); {a\D = —24,7° metanolig ban. A keletkezett tripeptid 4 g-ját a BO.C csoport lehasítása után 2,2 g az 1. példáiban leírt BOC-D-Phe-jONP-vel kapcsoljuk; így 2,5 g BOC-D-Pihe-D-Arg(NQ2)-Try-Gly-OMe keletkezik. A BOC csoport lehasítása után Z-Glu-20 (OtBu)-,His-N3 rVal kapcsoljuk. így 2,5 g Z-Glu!(OtBu)-HiswD-Phe^Arg(NQ2 )-Try~Gly-OMeJt nyerünk. Ennek az anyagnak 950 mg-ját elszappanosítás és hidrogénezés után BQC-Ser-Tyr-Seir-Met-N3 Hmal kapcsoljuk; így 510 mg 25 BOC-,Ser-Tyr-1 Ser~Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-D-Arg-Try-Gly-OH keletkezik. Az anyagot trifluorecetsav és víz 10 :1 arányú keverékével, majd acetát-nformájú .ioncserélővel kezeljük, aminek eredményeként 255 mg 7-D-Phe-8-D-30 -Arg-dekaipeptidet nyerünk. 5. példa: 35 lHD^Ser-2-D-Tyr-7-D-Phe-8-D-Arg-J dekapeptid előállítása. 40 45 50 g 55 60 65 A 3. példában leírt BQC-D-Ser-D-Tyr-Ser-Met-N3i 660 mg-ját a 4. példáiban leírt H-Glu(OtBu)-His-D-Phe-D-Arg-Try-Gly-OH 740 ragjával kapcsoljuk. 490 mg BOC-D-Ser-D-Tyr-Ser-Met-Glu<OtBu)-His-D-Phe-D-Arg-Try-Gly-OH védett dekapeptid keletkezik. A védő csoportokat lehasítjuk és a trifluoracetátot lecseréljük. Így 245 mg l-D-Ser-2-D-Tyr-7-D-Phe-8--D-Arg-dekapeptid keletkezik. 6. példa: 7-D-Phie-dekapeptid szuszpenziójának előállítása. • 200 jug 7-D-Phe-dekapeptidet 6 ml 0,01 n BC14>en oldunk. 0,3 ml ZnCl2-t (104 mg ZnCl2 /ml), 1 ml Na 2 HP0 4 -ot (6,3 mg Na 2 HPD 4 •2H2 O/ml+35,0 mg NaCl/ml) és 0,5 ml 0,1 n HCl-t tartalmazó keveréket adunk keverés köziben a peptid-oldathoz. A keverék pH-ját 7,8— 8,0 közé állítjuk be 0,5 n NaOH-val, és az össztérfogatot desztillált vízzel 10 ml-tre egészítjük ki. Ez a készítmény szoktatott patkányoknak beadva az elkerülési viselkedés váratlan megszűnését eredményezi, ami a 3. táblázatból is kitűnik. 7
