154811. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triacetilszpiramicin-I előállítására
3 154811 4 Savas közegben való nagyobb állandósága és fokozott in vivo baktériumölő hatása révén a találmány szerinti új termék határozottan haladást jelent a szpiramicinnel és összetevőivel szemben. 5 A triacetilszrpiramiein—I bruttó képlete C51H 82 Oi8N 2 , és a következő fizikai-kémiai tulajdonságai vannak: Külső megjelenés: krémszínű por. Olvadáspont: 156—167 C°. 10 [a]20 D =—97°, (c=l, etanolban). Elemanalízis: C 60—60,5%, H 8,2—8,4%, O 28,3%, N 2,6—2,65%. CH3 CO 12,5—12,9%. Ultraibolya színkép (meghatározva etanolos ol- 15 datból): abszorpciós maximum 230 nm (E ! 0/ cm =280 >-Infravörös színkép (meghatározva káliumbromiddal való keverékéből sajtolt próbatestből): 20 lásd a csatolt ábrát. Az infravörös színképen az abszcisszára felvittük egyrészt a mikronokban kifejezett hullámhosszakat (alsó skála), másrészt a cm_1 -ekben kifejezett hullámszámokat (felső skála), 25 az ordinátára pedig az optikai sűrűségeket. Az 1. táblázatban közöljük a termék fontosabb infravörös abszorpciós sávjait. 1. táblázat 30 3420 n.e. 1590 váll. 1150 e. 965 k. 2960 váll. 1450 e. 1115 e. 945 váll. 2920 e. 1370 e. 1080 k. 930 váll. 2850 e. 1335 váll. 1060 váll. 900 k. 35 2820 váll. 1292 k. 1040 n. e. 850 k. 2770 k. 1270 gy. 1020 váll. 835 k. 1730 n. e. 1230 n. e. 985 k. 800 gy. 1625 e. 1170 váll. n. e. = nagyon erős e. = erős k. = közepes gy- = gyenge 40 45 Vékony alumíniumoxid rétegen előállítottuk a szpiramicin-I, a tetraacetilszpiramicin-I és a triacetilszpiramicin-I kristályos termékek kromatogrammját. Az alumíniumoxid réteg üveglemezre felvitt 0,3 mm vastag réteg volt. Szo- 50 balhőmérsékleten való 12 órai szárítás után az alapot 1 órai 100 C°-on való hevítéssel aktiváltuk. Ezután foltokban rávittünlk a vizsgált anyag 0,1 mg/ml koncentrációjú benzoics oldatából 10—10 /d. mennyiségét (azaz foltonként 55 1 fig-t). Az előhívást benzol és etilacetát 60:40 térfogatarányú elegyével végeztük, ezt a kiindulási vonaltól 15—17 cm-re vándoroltattuk. Ezután a kromatogrammokat 15 percig szárítottuk meleg levegőáramban, majd biológiai- 60 lag előhívtuk Bacillus subtilis-szel beoltott agarrétegen. A következő példák szemléltetik a találmány gyakorlati megvalósítását annak korlátozása nélkül. Az alábbiakban az aktivitást biológiai 55 úton határoztuk meg diffúziós módszerrel, Bacillus subtilist alkalmazva érzékeny mikroorganizmusíként és tiszta szpiramicin mintát standardként. Az aktivitást egység/mg-iben (E/mg) fejezzük ki, amikor is az egység a terméknek az a legkisebb mennyisége, amely egy ml alkalmas táptalajban oldva megakadályozza Staphylococcus aureus ATCC 6538 P fejlődését adott körülmények között. 1. példa: Tetraacetilszpiramicin-I előállítása 1000 g szpiramicin-I-et 4752 g piridin és 648 g ecetsavanhidrid összekeverésével kapott 5400 g acetilező keverékben oldva 24 óra hosszat 100 C°-on tartunk. Lehűtés után a reakciókeveréket 10 kg jeges vízre öntjük, az oldat pH-ját 800 ml 10 n nátronlúg hozzáadásával beállítjuk 7,5-re, és 2 liter, majd 1 liter kloroformmal extraháljuk. Az egyesített kloroformos kivonatokat négy íziben 4—4 liter vízzel mossuk, leszűrjük, majd bepároljuk. A kapott maradékot 1 torr nyomás alatt megszárítjuk, majd ismét feloldjuk 30 1 ciklohexánban. A kapott oldatot 28 C°-on szűrjük, majd bepároljuk. A szilárd maradékot 1 torr nyomás alatt megszárítjuk. Így 1150 g tetraacetilszpiramicin-I-et kapunk 1185 E/mg hatóanyagtartalommal. Olvadáspontja 148—152 C°; [a ]22 D = _106° (c = 2, etanolban); CH 3 CO 17,0%. Triacetilszpiramicin-I előállítása A fent leírt módon készült 1000 g tetraacetilszpiramicin-I-et 7200 ml metanol és 1800 ml víz elegyében oldunk, és az oldatot 24 óra hosszat visszafolyató hűtő alatt melegítjük. Lehűtés után 10 1 vizet adunk hozzá, és 4 1 metilénkloriddal extraháljuk. Dekantálás után a metilénkloridos oldatot bepároljuk, és a visszamaradt terméket 1 torr nyomás alatt 60 C°-on állandó súlyig szárítjuk. Így 705 g triacetilszpiramicin-I-et kapunk 1670 E/mg hatóanyagtartalommal. Olvadáspontja 148—160 C°; [a]22 D = —86° (c = 2, etanolban); CH3CO 12,6%. 2. példa: Triacetilszpiramicin-I tisztítása kristályosítással Az 1. példában leírt módon kapott 27,5 g nyers triacetilszpiramicin-I-et visszafolyató hűtő alatt feloldunk 50 ml izopropiloxidban. Ezután a kapott oldatot jégfürdőben keverés közben 24 óra hosszat kristályosítjuk. A kristályos terméket szűréssel elválasztjuk, három ízben 10—10 ml izopropiloxiddal mossuk, és 40 C°-on 2 torr nyomás alatt 12 óra hosszat szárítjuk. 13,5 g kristályos triacetüszpiramicin-I-et kapunk 150—152 C° olvadásponttal. 2
