154656. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására

9 A szűredékhez 150 ml etilacetátot adunk és a szerves oldószeres fázist 0° hőmérsékleten 30— 30 ml 3%-os borkősav oldattal háromszor extraháljuk a pentapeptid feleslegének eltávolítása céljából. Vízzel még néhányszor mossuk az ol- 5 datot, míg az semleges kémhatást nem mutat, majd szárazra pároljuk be. A lipofil szennyeződések eltávolítása céljából a maradékot 10 ml metanol és 20 ml etilacetát elegyében oldjuk és az oktapeptidet 120 ml petroléter hozzáadásával 10 lecsapjuk. A kenődő massza alakjában levált oktapeptidet vákuumban 40° hőmérsékleten megszárítjuk. Az így kapott 3,1 g nyers terméket végső tisztítás céljából Craig-megosztásnak vetjük alá metanol-tompító-kloroform-széntetra- 15 klorid 30 :10 : 3 : 30 arányú oldószer-rendszerben (a fentebb megadottal azonos tompítót alkalmazva), 225 fokozatban, 10—10 ml fázis-térfogattal. A kapott kromatográfiailag egységes oktapep- 20 tid-származékot a 65—96. elemből (vmax

=78; K = 0,53) különítjük el szárazra történő bepárlás és az ammóniumacetát nagyvákuumban való elszublimálása útján. A terméket kb. 130—140°-on olvadó fehér 25 amorf por alakjában kapjuk, amely szilikagélen az alábbi R/-értékéket mutatja: R/ (43A) = 0,74 R/ (kloroform-metanol = 9:1) = 0,54 30 R/ (benzol-aceton = 1:1) = 0,33 4. H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 35 1,46 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 40 nil metanollal készített oldatához 300 mg 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk és rázókacsában, a széndioxid elnyeletése mellett hidrogénezzük. A 40 hidrogénfelvétel kb. 20 perc alatt befejeződik. A katalizátort 1 óra múlva kiszűrjük, a metanollal történő utánöblítéssel kapott szűredéket szárazra pároljuk be. Ily módon mennyiségi hozammal kapjuk a kromatográfiailag egységes 45 dekarbóbenzoxilezett oktapeptid-származékot, kb. 110—120°-on olvadó fehér amorf por alakjában. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatog- 50 rafálással az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (43A) =0,53 R/ (kloroform-metanol = 9:1) = 0,34 55 5. Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 1,98 g Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)- 6

0 -Lys(BOC)-NHNH2

22 ml absz. dimetilformamiddal készített oldatát —25° hőmérsékletre hűtjük le és keverés közben cseppenként hozzáadunk 3,4 ml 2,115 n sósav oldatot, majd 0,378 ml 5 n nátriumnitrit .oldatot.. A kapott tiszta 55 10 oldatot- 15 percig tovább keverjük —10° hőmérsékleten, majd az előző pontban leírt módon előállított 1,313 g oktapeptid-származék 4 ml dimetilformamiddal készített és—5° homersefcletre lehűtött oldatát adjuk hozzá. 1 ml dimetilformamiddal utána öblítünk,, majd az elegyhez lassan hozzácsepegtetünk —5° hőmérsékleten 1,05 ml trietilamint. A reakcióelegyet azután további 30 percig keverjük, majd 0° hőmérsékleten 15 óra hosszat állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután bepároljuk és a maradékként kapott viszkózus olajhoz 20 ml vizet adunk, aminek hatására a termék kenődő tömeg alakjában kiválik. Ezt 20 ml metanollal melegítve ismét oldjuk, majd 30 ml víz hozzáadásával ismét kicsapjuk a peptidet. A levált termék 0°-ra lehűtve és eldörzsölve megszilárdul és por alakú állapotba megy át; az így kapott szuszpenziót leszűrjük, a terméket vízzel mossuk és megszárítjuk. A fenti módon kapott nyers terméket Craig-megosztásnak vetjük alá metanol-tompító-klorof orm-széntetraklorid 60 : 20 : 3 : 60 arányú oldószer-rendszerben (a tompító azonos összetételű a 2. pont alatt megadottal), 20—20 ml fázis-térfogatokkal. 218 fokozat után a tisztított terméket a 105—134. elemekből (vmax

= 121; K = = 1,25) különítjük el, szárazra történő bepárlás és az ammóniumacetát nagy vákuumban való elszublimálása útján. Ily módon kromatográfiailag egységes termékként, kb. 180—190°-on olvadó fehér amorf por alakjában kapjuk a védett tetradekapeptidet. Szilikagélen az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (43A) =0,80 R/ (kloroform-metanol = 9:1) = 0,49 6. H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Vial-Tyr-4Pro-OtBu 1,66 g Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOiC)-Val-Tyr-ProjOtBu 40 ml metanollal készített oldatát 300 mg 10%-os palládiumos aktívszén hozzáadásával a szokásos módon hidrogénezzük. A katalizátort azután kiszűrjük és a szűredéket szárazra bepároljuk; ily módon közvetlenül kromatográfiailag egységes, amorf por alakú, 175—190 C°-nál éles olvadáspont nélkül olvadó termék alakjában kapjuk a fenti peptidet, amely szilikagélen az alábbi R/-értékeket mutatja: R/ (43A) =0,41 R/ (kloroform-metanol = 9:1) = 0,24 7. BOC-.D-Ser-Tyr-,Ser-Met-Glu(0'tBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val~Lysi(BOC)-Val-Ty,r-Pro-OtBu 378 mg BOiC-D-,Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH (előállítását a törzs-5