154656. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
154656 « diibensálammnal vagy más tercier nitrogénlbázissal képezett sót alkalmazunk. Az említett polimerek ismert anyagok, vagy ismert módszerekkel, pl. a M. ,Idelson és mtsai, J. Am. Ghem, Soc. 80, 4631 és köv. old. (1958) által leírt módszerrel állíthatók elő. Így pl. eljárhatunk oly módon, hogy glutaminsav-a-karboxianhidrid-y-benzilésztert vagy -terc.butilésztert dioxánfoan ammóniával vagy valamely aminnal reagáltatunk meghatározott, pl. 100 : 1 mólarányban (a kívánt poliimerizáció-foktól függően), majd a polimerizáció befejeztével a védőcsoportokat lehasítjuk, pl. á foenziloxi-csoportot brómhidrogénsavval jégecetben, a tercJbutiioxi•csopoirtot pedig trdfluoreoetsawal való kezelés útján. Az egységes, meghatározott lánchosszúságú polimerek előállítása céljából e polimereket a paptidkémiáfoan ismert eljárások (karbodiimid-^módszer, azid-módszer stb.) alkalmazásán alapuló szintézissel is előállíthatjuk. A poliimérek koncentrációja az ilyen gyógyszerkészítményekben az illető só oldhatóságától és a viszkozitástól függően választandó meg. A polimer a készítményben oldott állapotban legyen jelen és a készítmények injekció útján beadbatónak kell lennie. Az adrenokortikotrop hatású peptid koncentrációját oly módon szabjuk meg, hogy a készítmény ml-enkint pl. 10—SO NE aktitvitást mutasson. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. E példákban a hőmérsékleti adatok Celsius tik. E példákban a hőmérsékleti adatok Celsiusfokokban értendők. A számjelzésekkel megadott vékonyrétegű kromatográfiai rendszerek az alábbi összetételűek: 43A rendszer: terc.amilalkohol-izopropanol-víz (100 : 40 : 10), 45 rendszer: szek.butanol — 3%-os vizes ammónia (100 : 44), 100 rendszer: etilacetát-piridin-jégecet-víz (62:21:6:11), 101 rendszer: n-butanol-piridin-jégecet-víz (30 : 20 : 6 : 24). A példákban az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk a védőcsoportok megjelölésére: Z = karbobenzoxi-csoport, BOC = tere.butiloxikarbonil-csoport, tBu == teriabutil-csapört. 1. példa: 1. Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NHNH2 10 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3 [előállítva Z-Lys(BOC)-QH4>ól és H-Lys(BQC)-OCH3 -ból, diciklohexil-karbodiimid segítségével] 160 ml metanollal készített oldatához 7,8 ml hidrazinhidrátot adunk: A tiszta oldatot 24 óra hosszat állni hagyjuk 25° hőmérsékleten, majd eredeti térfogatának kb. 1/3-ára pároljuk be. 200 ml víz hozzáadására olajos csapadék válik ki, amely lehűtés és eldörzsölés hatására megszilárdul és porítható. Ezt a csapadékot leszívatással elkülönítjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. Az így kapott nyers terméket metanol, etilacetát és petroléter elegyéből egyszer átkristályosítjuk, ily módon 118—119,5° olvadáspontú terméket kapunk. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatog-10 rafálással az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (43A) =0,40 R/ (klorof ormnmetanol = 9:1) = 0,75 15 2. Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-OH 1,87 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOQ-NHNH2 15 ml frissen desztillált dimetilformamiddal készített oldatát —25° hőmérsékletre hűtjük le. Ezután 80 lassan hozzácsepegtetünk 2,07 ml. 4,35 n sósav oldatot, majd ezt követően 0,66 ml 5 n nátriúmnitrit oldatot. Az elegyet 10 percig keverjük —10° hőmérsékleten, majd 692 mg L-prolin 4,2 ml 2:1 arányú dimetilformamid-^víz elegy-25 gyei készített oldatát adjuk hozzá. Végül még ugyancsak —10° hőmérsékleten hozzácsepegtetünk 1,82 ml trietilamint, majd a reakcióelegyet éjjelen át 0°-on, majd további 2 óra hoszszat szobahőfokon állni hagyjuk. Ezután nagy-S0 vákuumban kb. 4 ml térfogatra pároljuk be az oldatot és a kapott ragadós maradékhoz 25 ml vizet adunk. 0° hőmérsékletre történő lehűtés és eldörzsölés hatására a termék poríthatóvá válik. Leszívatjuk, kevés vízzel mossuk és nagy-35 vákuumban 40° hőmérsékleten megszárítjuk. A nem kristályosítható nyers terméket tisztítás céljából Craig-megosztásnak vetjük alá metanol-tompító-kloroform-széntetraklorid (35 :13: : 15 :15) oldószer-rendszerben, 10—10 ml fázis 40 -térfogatokkal (tompító: 28,5 ml jégecet + 19,25 g ammóniumacetát 960 ml vízben). 220 fokozat után a 49—73. megosztási elemkböl (v max~ 61; K = 0,39) különítjük el és szárazra történő bepárlás és az ammóniumacetát elszublimálása út-45 ján nyerjük ki a kromatográfiailag tiszta, de amorf, kb. 70—80°-on olvadó tripeptid-származékot. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi R/-értékeket kapjuk: 50 R/ (kloroform-metanol ==9:1) = 0,19 R/ (43A) = 0,29 R/ (45) = 0,52 55 3. Z-Lys(BOC)-Lys-(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)Val-Tyr-Pro-OtBu 2,4 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-OH és 3,12 g H-Val-Lysi(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 30 ml absz. 60 kloroformmal készített oldatához 0° hőmérsékleten 0,845 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, az elegyet 1 óra hosszat keverjük 0° hőmérsékleten, majd 30 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk. A levált kristályos diciklohexil-karbamidot 65 kiszűrjük és kevés etilacetáttal utána mossuk. 4
