154641. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy aszpergillopeptidáz előállítására
154641 15 16 12. példa: Lemezkeszuszpenziókat készítettünk a 10. példában leírt módon. 0,001 /«g/ml szuszpenzió A enzimkeveréket inkubáltunk a lemezkékkel szobahőmérsékleten 5 percig. Ezután különféle mintákat centrifugáltunk és mostunk a 10. példában leírt módon egyszer, kétszer és háromszor a végső szuszpendálás előtt. A kalciumionok és az ADP hatását mértük. Kontroliképpen egy enzim nélküli lemezkeszuszpenzió-mintát mostunk háromszor mérés előtt. Kezelés % tömörülés ontroll, háromszor mosva (Ca++ , ADP) 51 V. enzimkeverék, egy mosás, Ca++ ADP 20 ÍL enzimkeverék, két mosás, Ca++ , ADP 19 i. enzimkeverék, három mosás, Ca++ , ADP 17 13. példa: Vérlemezkében gazdag plazma készítésére vért vettünk a 10. példában leírt módon azzal a különbséggel, hogy 3,8% trinátriumcitrátot használtunk antikoagulensként, egy rész citrátot keverve kilenc rész vérbe. A centrifugálást szobahőmérsékleten 15 percig 300Xg-nél végeztük. A kapott lemezkékben gazdag folyadékból a felső háromnegyed részt használtuk a vizsgálathoz. Ebben a rendszerben nincs szükség kálciumionok hozzáadására, az ADP-t pedig 8 /tg/ ml plazma végső koncentrációban használtuk. A tömörülést a 10. példában leírt módon értékeltük. Az A enzimkeveréket 10, 25 és 50 /«g/ml plazma végső koncentrációban 10 perccel az ADP előtt adtuk hozzá. A gátlás mértékét enzim •nélküli kontrollhoz viszonyítottuk. , Adalék A enzimkeverék 10 /*g/ml, ADP A enzimkeverék 25 /*g/ml, ADP A enzimkevérék 50 í*g/ml, ADP 24 47 62 14. példa: 5 ml vért vettünk egy 2,2 kg súlyú him • albinó nyúltól. A vért citráttal kevertük, és lemezkékben dús plazmát készítettünk a 13. példában leírt módon. Az ADP adalék in vitro hatását a plazmában levő lemezkékre a 11. ábrában leírt módon mértük. Ezután 4,0 mg/ kg A ehzimkeveréket intravénásán befecskendeztünk, és lemezkékben dús plazmát gyűjtöttünk különböző időkben az infúzió után. Az in vitro tömörülést ADP hozzáadása után az előbbi módon értékeltük. 10 15 20 25 30 35 40 Tömörülésgátlás, 45 % 50 55 60 65 Tömörülés, % 56 után 55 után 34 után~ 39 után 38 után 44 után 59 injekció előtt 4 órával az injekció 1 nappal az injekció 2 nappal az injekció 3 nappal az injekció 4 nappal az injekció 7 nappal az injekció A hatásnak hosszabb ideig való tanulmányozása céljából egy him albinónyúlba, 4,15 kg súllyal, befecskendeztünk intravénásán 4,0 mg/ kg A enzimkeveréket. 5 nap elmúltával egy második 4,0 mg/kg enzimadagot adtunk. Tömörülés, % injekció előtt 61 1 nappal az injekció után 51 3 nappal az injekció után 40 4 nappal az injekció után 39 5 nappal az injekció után 52 második injekció 6 nappal az első injekció után 40 7 nappal az első injekció után 20 15. példa: Vérlemezkeszuszpenziókat készítettünk és az ADP hatását a 10. példában leírt módon értékeltük. A szuszpenzióhoz 10 perccel az ADP e^tt aszpergillopeptidáz ARL 1-et adtunk. Adalék kontroll (Ca++ , ADP) aszpergillopeptidáz ARL 1, 10-3 ftg/ml, Ca++, ADP aszpergillopeptidáz ARL 1, 10-* Mg/ml, Ca++, ADP aszpergillopeptidáz ARL 1, 10-5 Mg/rxil, Ca++ , ADP aszpergillopeptidáz ARL 1, 10-6 ítg / m i j Oa ++ , ADP 16. példa: Tömörülés, % 51 0 0 0 0 Vérlemezkékben dús plazmát készítettünk, és az ADP hatását értékeltük a 10. példában leírt módon. A tömörülés csökkentésére gyakorolt hatásuk összehasonlítására aszpergillopeptidáz ARL 1-et, illetve A enzimkeveréket adagoltunk 10 perccel az ADP előtt. Adalék Tömörülés, % kontroll (ADP) 55 A enzimkeverék 50 Mg/ml,. ADP 45 • aszpergillopeptidáz ARL 1 2,5 Pg/ml, ADP 29 aszpergillopeptidáz ARL 1 5,0 Mg/ml, ADP 15 8
