154641. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy aszpergillopeptidáz előállítására

154641 17 18 Az aszpergillopeptidáz ARL 1 emberekre gyakorolt hatásának szemléltetésére az alábbi példákat közöljük. 17. példa: 5 120 mg A enzimkeveréket steril' száraz por alakjában feloldottunk 500 ml 5%-os fruktóz oldatban, és intravénás infúzió alakjában egy óra alatt egyenletes ütemben beadtunk egy be- 10 tegnek, a kezelés előtt meghatározva a beteg vérének vérlemezketömöfülési értékét. Az infúzió befejeztével a spontán aggregációra gyakorolt hatást szabályos időközökben vett plazmaminták vizsgálatával követtük. 15 Az 1. ábrán bemutatjuk az eredményt 3 betegen. Kezelés előtt az egyik beteg vére normális, a másik két beteg vére patologikusán megnőtt töxnörülési értéket mutatott. Valamenynyi esetben a tömörülés határozott csökkenését 20 tapasztaltuk, maximális mértékben a beadás után 4 nappal. 18. példa: Szabadalmi igénypontok: 25 A 17. példában leírt módon 150 mg A enzimkeyereket juttattunk be, és a hatást a leírt módon tanulmányoztuk. A 2. ábrán mutatjuk be az eredményeket ilyen adaggal kezelt 3 betegre. A tömörülési érték szignifikáns csökké- 30 nését tapasztaltuk. 19. példa: Egy beteget, akinek a vérében a lemezkék 35 tömörülése erősen fokozódott, és ezért trombu* vagy embolus képződésének veszélye forgott fenn, a 17. példában leírt módon ismételten 150 mg-os adagokkal kezeltünk, majd meghatároztuk a tömörülésre gyakorolt hatást. 40 Az eredményeket a 3. ábrán mutatjuk be. A tömörülés határozott csökkenése figyelhető meg már az első adag beadása után, és az is kitűnik, hogy újabb adagok beadásával a tömörülés alacsony szinten tartható ingadozások nélkül hosz- 45 szú ideig. 50 1. Eljárás egy eddig ismeretlen, vízben, konyhasóoldatban és a szakványos pufferolt oldatokban oldható, állatok és emberek kezelésére alkalmas, a vérlemezkék ragadósságát és összetömörülését csökkentő, trombusok és embolu- 55 sok keletkezését gátló, karboximetilcellulózon 5,5 pH-nál adszorbeálódó és 7,5 pH-ra pufferolt legalább 0,005 mólos ammóniumacetát-oldattal deszorbeálható, 0,01 mólos, 2,5 pH-s foszfátpuff erral egyensúlyba hozott és eluált Am- 60 berlit CG:50II ioncserélő gyanta által visszatartott, 0,001 mólos, 6,8 pH-s foszfátpuff erral egyensúlyba hozott és eluált hidroxilapatit-oszlopon számottevő adszorbeálódás nélkül áthaladó, gélszűrés alapján megállapítva a protéáz I aszpergillopeptidáz ultracenrifugálással megállapított 20 000—30 000 molekulasúlyánál kisebb molekulasúlyú peptidáz, az aszpergillopeptidáz ARL 1 előállítására az aszpergillopeptidázoknak Aspergillus oryzae tenyészetéből kapott és előnyösen csersavval vagy ligninnel tisztított oldatából azzal jellemezve, hogy az aszpergillopeptidázokat tartalmazó oldatot érintkezésbe hozzuk egy karboxilcsoportokat tartalmazó, poliszacharid, polisztirolamid vagy poliakrilamid alapú polimerekből vagy dietilaminocellulózból álló ioncserélővel vagy hidroxilapatittal, amikor is az aszpergillopeptidáz ARL 1 vagy az adszorbens-fázisban, vagy az oldat-fázisban feldúsul, és abban az esetben, ha az aszpergillopeptidáz ARL 1 adszorbeálódott, az adszorbensről egy 6—8 pH-ra beállított eluáló oldattal feldúsult frakciót eluálunk, majd ha kívánatos, az aszpergillopeptidáz ARL l-ben feldúsult oldatot tovább dúsítjuk önmagában ismert módon, például gélszűréssel, frakcionált kicsapással, adszorpciós kromatografálással, ioncserélő kromatografálással, elektroforézissel vagy dialízissel, illetve ilyen műveletek összekapcsolásával. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az aszpergillopeptidáz ARL 1-et karboxilcsoportokat tartalmazó ioncserélőn 4—6 pH-nál való adszorpcióval és az aszpergillopeptidáz ARL l-ben feldúsult fázisnak 0,005—0,100 mólos ammóniumacetátoldattal való eluálásával dúsítjuk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy adszorbensként 0,7—0,9 milliegyenérték karboxilcsoportot tartalmazó karboximetileellulózt használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy egy ioncserélővel való kezeléssel aszpergillopeptidáz ARL l-ben feldúsult peptidázkeveréket érintkezésbe hozunk egy foszfáttal pufferolt hidroxilapatitoszloppal, amelyen a keverékben levő egyéb aszpergillopeptidázok és más proteinek erősebben adszorbeálódnak, mint az aszpergillopeptidáz ARL 1, és így az aszpergillopeptidáz ARL l-ben feldúsult oldatot kapunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az ioncserélővel való kezeléssel aszpergillopeptidáz ARL l-ben dúsított oldatot tovább dúsítjuk keményítőgél-elektroforézissel. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az adszorbens pH-ját és az eluáló folyadék ionkoncentrációját és pH-ját úgy állítjuk be, hogy a kapott aszpergillopeptidáz-keverék legalább 1 súly% aszpergillopeptidáz ARL 1-et tartalmazzon. 1 rajz, 3 áibra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6807410. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 9