154583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina előállítására
3 154583 4 kombinált vakcinát adhatunk íbe intnadermälisan és 0,4 ml-t a mélyebb szövetekbe. Ha gallér nélkül alkalmazzuk a függőleges feltétet, akikor lényegileg a vakcina teljes mennyiségét a bőrnél mélyebben fekvő szövetekibe juttathatjuk. A (műszer megfelelő beállítása útján a beadott: (mennyiségeik széles határok között változtathatók. K&nyaró (rubeola) elleni vakcinaként bármilyen emberi használatra elismerten alkalmas vakcina-készítmény, pl. az Enders-féle B-szintű legyengített élő vakdna-készítimény (amelyet csiirlkeetrdbriOHsepkultJÚriáiri tenyésztenek) alkalmazható. Az ilyen vakcina a kereskedelemben is beszerezhető, pl. a Merck & Co. cég „Rubeovax" kereskedelmi elnevezésű készítménye alakjában. Használható azonban kanyaró (rubeola!) elleni Vakcinaként a Sehwarz-tféle törzsből nyert legyengített élő virus is, amely a kereskedelemben, szintén beszerezhető. A kanyaró (rubeola) elleni vakcinét célszerűen oly íertőzőíképességli fokú állapotban alkalmazzuk, hagy az előállított végtermék egyetlen beadásra kerülő adagja legalább 1000 TCID50 (50%ban sejtkultúra-fertőző adag; 50% tissue culture infective doses) adagnak megfelelő menynyiségű legyengített vírust tartalmazzon. (Jelenleg az amerikai egészségügyi szabvány 100 TOIDso/adag koncentrációt ír elő minimális követelményként, ez az előírás azonban a jövőben megváltozhat.) Ha nem kívánunk kereskedelemiben beszerezhető kanyaró'-, ill. rubeala-vakcinát alkalmazni,, akkor az alkalmazandó vakcinát a szokásos módszerekkel házilag is előállíthatjuk. Erre a célra jól alkalmazható az az eljárás, amelynek során a vírust icsirkeambrió^szövetkultúrán szaporítják. Az ilyen sejtkultúrákat előnyösen szintetikus táptalajon., pl. az ismert bovin-szérumot és megfelelő antibiotikumokat is tartalmazó „Medium 199" közegben tenyészthetjük. A sejtkultúra fertőzésére Edmonstonféle vírus-törzs vagy más, idegen vírusoktól bizonyítottan mentes és ilyen célokra alkalmas kanyaro-vírus törzs tiszta kultúrája használható. A sjetkultúráíbol kitermelt vírust szűréssel derítjük, az idegen sejt-töredékeik eltávolítása céljaiból. Az így kapott vírus-készítményt azután az amerikai közegészségügyi hatóságok által előírt szabványos vizsgálati módszerekkel ellenőrizhetjük. Az emberi használatra vonatkozólag előírt valamennyi feltételt kielégítő vákeinai-készítlmény alkalmazandó a találmány szerinti kombinált vakcina előállítására. HilmlŐMvalkcinaként szintén bármely, emberi használatra elismerten alkalmas himlői-vakcina használható. Ez, a vakcina borjakon, csirkeembriókon, csíirkeemibrió^szövetkultúrakon vagy más, erre alkalmas szöveteiken szaporítható, bármely szokásos és ilyen célra alkalmas eljárás szerint. A haimlŐMvakíCina élőállítására és ellenőrző vizsgálatára ugyancsak, pl. az, amerikai Állami Közegészségügyi Intézet biológiai szabványosító osztálya által kiadott előírásokiban megadott eljárások alkalmazhatok. A himlő-vakcina legtöfbbnyire élő vakcina- (tehénhimlő-) vírust tartalmaz, amelyet a borjú (vagy más, 5 erre alkalmas állat) ectodermiumában képződött hólyagokból nyerünk ki, az állat erre alkalmas vakcina-vírussal történt mesterséges fertőzése folytán bekövetkezett hólyagosodás állapotában. A hólyagokat leszedjük a borjú-10 ról, Hl. egyéb állatról és az említett amerikai egészségügyi szabványokban előírt módon pép vagy „rymphia" alakjában vetjük alá az előírt ellenőrző vizsgálatoknak. Azután az így kapott készítményekiből az idegen fehérjéket eltávolít-15 juk és a szokásos módszerekkel teljesen, vagy messzemenően eltávolítjuk az esetleges baktérium- és gomba-fertőzéséket. Utána a kapott készítményt a szokásos vizsgálati módszereknek vetjük alá biztonságos alkalmazhatóság, 20 tisztaság és hatásosság szempontjából. A két vakcinához valamely erre alkalmas staíbiüzálószert adunk, hogy megelőzzük, vagy rninimáliisra csökkentsük a szárítás során esetleg fellépő hatásosság-csökkenést. A végtermék-25 hez neomiciin-szulfátot, vagy más ilyen célokra alkalmas antibiotikumot és tartósítószert is adhatunk. A kétféle vakcina összekeverése aszeptikus körülmények között történik. A kapott kombi-S0 nált Vakcinát olyan koncentrációra állítjuk be, hogy az emberi használatra szánt egyszeri adagnak megfelelő térfogat legalább 10-' TCID50 kanyaró-, 111. ' rubeola-JVÍrust tartalmazzon, a vaiccinat-vírus pedig 0,1 ml térfogatban £5 kb. 105 PFU-egységet („plaque forming unit; folt-képző egység") tartalmazzon. Az ismert folt-képző módszerrel meghatározott vírus-üter megfelel a citopátiás hatás (TCIDBO) megfigyelése alapján kapott mérőszámnak. (Ezeket a 40 vizisgálati módszereket és minőségi előírásokat a fentebb idézett amerikai szabvány részletesen ismerteti.) A fenti vírus-koncentráció elegendő' arra, hogy gyakorlatilag minden nem-immunis em-45 bérben meigfelelő antitest-iképződést váltson ki mindkét fajta vírussal szemben. Az említett koncentráció továbbá biztosítja azt is, hogy a himlő elleni védőoltás a szokásos módon „megeredjen", az ismert var-képződés köziben. 50 A fenti módon előállított kombinált vakcinát ezután üvegedényeikbe töltjük, —60 C° hőmérsékleten megfagyasztjuk, majd liofilizáláasal szárítjuk. 55 A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: 60 Oly kanyaró-vakcinát alkalmazunk, amely az elegyítés előtt 103 -4 TCID 5 o/0,l ml titert mutat. Az alkalmazásira kerülő vaccinia-virus szá-65 mított tiitere Ws/' PFU/ml. Ezt a himlő-vakci-2
