154494. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és egyszer az alfa-hidroxi-butirát-dehidrogenáz-aktivitás meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1966. VI. 29. (AE—216) Német Demokratikus Köztársasáig-beli elsőbbsége: 1965. VII. 08. Közzététel napja: 1967. X. 23. Megjelent: 1968. IX. 30. 154494 Szabadalmi osztály: 42 1 3 Nemzetközi osztály: G 01 n Decimái osztályozás: Feltaláló: Dr. med. habü Wagenknecht Claus, Berlin, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Aräslieimittelwerk Dresden, Radebeul, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás és vegyszer az alfa-hMroxi-butirát-dehidrogenáz-aktivitás meghatározására A találmány tárgya eljárás és vegyszer az alf a4iidroxi-buth~át-dehidrogenáz-aktivitás kimutatására és meghatározására az emberi és állati szervezet extra- és intraeelluláris folyadékában, 5 Ismeretes az, hogy az alfa-hidroxibutirát-dehidrogenáz (HBDH) az alfa-hidroxibutirátnak alfa-ketobutiráttá való átalakítását nikotinamid-adenindinukleotid (NAD) koenzim segítségéve] végzi. 10 A HBDH aktivitást ismert módon úgy lehet meghatározni, hogy az alfa-ketobutirátot redukált nikotinamid-adenindinukleotiddel alf a-hidroxibutiráttá és nikotinamid-adenindinukleotiddá alakítják át és a redukált NAD időegység- 15 beni csökkenését az UV-tartományban (340, ül. 366 nm) való méréssel követik. Egy másik lehetőség abban áll, hogy az alfa-ketobutirátot fenilhidrazirmal színezékkomplexvegyületté kapcsolják össze és ezzel a reakciót egy meghatá- 20 rozott idő eltelte után leállítják. A színezékkomplexet ezután fotometriás úton mérik. A fotometriás méréssel az enzimaktivitás mértéke határozható meg. Az első ismert módszer hátránya az, hogy a 25 méréshez olyan optikai műszerek szükségesek, amelyek az ultraibolya-tartományban az extinkció változás időegységben való mérésére alkalmasak- A másik ismert módszer pedig azért hátrányos, mivel a reakciót kinetikailag so nem lehet követni, továbbá a mérés rendkívül idő- és munkaigényes. A fentiekből adódik az a feladat, hogy a HBDH-aktívitást ultraibolya-tartományban mérőműszer vagy más fotométer nélkül, egyszerű kísérleti körülmények között kinetikailag lehessen meghatározni. A találmány feladata a kinetikailag az ultraibolya-tartományban mérhető reakciót a látható fény hullámhosszába átvinni és ezáltal az emberi szem számára érzékelhető reakcióvá átalakítani. A kitűzött feladatot oly módon oldottuk meg a találmány szerint, hogy a reakciót egy mérőlánc segítségével és egy színezékrendszerhez való kapcsolással követjük, mely színezékrendszer fenazinmetoszulfátból és diklórfenolinfenolból áll. A találmány szerint az oxidációs reakció során az alfa-hidroxibutirát alfa-ketobutiráttá oxidálódik, NADH2 képződik és ez a találmány szerint beadagolt fenanzinmetoszulfát következtében oxidálódik. A színezék hidrogénjét a diklőrfenolindofenolnak adja át. Ezen mérőlánc beiktatásával az oxidációs aktivitást fokozatosan mérhetjük, amikoris a diklór-fenolindofenolnak leukoszínezékké való átalakítása következik be. Ezáltal pedig exakt aktivitásmérést lehet megvalósítani. A HBDH aktivitás meghatározása a látható fény hullámhosszában nagy pontossággal és op-154494
