154485. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes hatású szer előállítására

13 154485 14 pH-értékét nátriumkarbonáttal 7,0-ra állítjuk és 1 g „Difco" tripszint adunk hozzá. A tripszines kezelést 37 C° hőmérsékleten 12 óra hosszat folytatjuk, folytonos keveréssel és kloroform hozzáadásával. 500 ml így kapott elegyet percenként 8000 fordulattal 130 percig centrifugálunk. A tökéletlenül adszorbeált maradékokból álló {2) üledéket alkohollal mossuk és megszárítjuk. 5 g száraz anyagot kapunk. A szupernatáns folyadékot (3) egyenlő térfogatú alkohollal keverjük. A képződött csapadékot percenként 27O00 fordulattal történő eentrifugálás útján elkülönítjük és ezt a (4) csapadékot kismennyiségű vízben újból feloldjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 3500 mg száraz anyagot kapunk. A kapott termék elemzési adatai: nukleinsav 13,54%, fehérjék 62 %. Ha ezt a terméket intravénásán beadjuk 4 mg-os adagokban a jól kifejlett „180" szarkomával «fertőzött egereknek, mind a 10 kezeli állatnál a tumor messzemenő nekrózisát tapasztaljuk. A fent említett utolsó centrifugálási művelet során kapott szupernatáns folyadékot (5) egyenlő térfogatú alkohollal elegyítjük. Ujabb csapadékot kapunk; percenként 2700 fordulattal 15 percig centrifugálunk, majd az így elkülönített csapadékot (6) újból feloldjuk csekély mennyiségű vízben és az oldatot liofilizáljuk. 3300 mg száraz anyagot kapunk, amelynek elemzési adatai: nukleinsav 30,03%, fehérjék 29 %. Ha ezt a terméket jól kifejlett „180" szarkomával fertőzött egereknek 4 mg-os adagokban intravénásán beadjuk, mind a 10 kezelt állat esetében a tumor messzemenő nekrózisát tapasztaljuk. 14. példa: A 13, példában említett (1) elegy 13 000 mijét percenként 8000 fordulattal 30 percig centrifugáljuk. A kapott szupernatáns folyadékot (1) eltávolítjuk. A csapadékot (2) egymás után háromszor zsírtalanítjuk alkohol és éter 1 :1 arányú elegyével. Az oldószer eltávolítása után 544 g száraz anyagot (3) kapunk. 15. példa: A 14. példában leírt módon kapott 10 g (3) terméket 100 ml só oldattal hígítjuk. Az elegyet sósavval 2 pH-értékre savanyítjuk, majd 100 mg pepszint adunk hozzá. Az elegyet 37 C° hőmérsékleten 4 óra hosszat állandóan keverjük, majd percenkónt 2700 fordulattal 15 percig centrifugáljuk. A szupernatáns folyadékot (1) eltávolítjuk. A csapadékot i(2) az . eredetivel egyező térfogatú só oldatban oldjuk, majd az oldatot 7 pH-értékre semlegesítjük és percenként 8000 fordulattal 30 percig centrifugáljuk. Az adszorbeálatlan maradékokból álló ;(3) csapadékot alkohollal mossuk, majd meg-5 szárítjuk. Ily módon 3900 mg száraz anyagot kapunk. A szupernatáns folyadékot (4) liofilizáljuk. Ebből 1300 mg száraz terméket kapunk, amelynek elemzési adatai: 10 nukleinsav 10,09%,, fehérjék 88 %. Ezt a terméket jól kifejlett „180" szarkomával fertőzött egereknek 2 mg-os adagokban intra-15 vénás injekcióban beadtuk; a 20 kezelt állat közül 17-nél a tumor messzemenő nekrózisát tapasztaltuk; a kezelt állatok közül 9, 10 nap alatt teljesen meggyógyult. 20 16. példa: A 14. példában említett (3) termék 10 g-ját 1O0 ml só oldattal hígítjuk, az elegy pH-értékét 7-re állítjuk be és 100 mg „Difco" tripszint 25 adunk hozzá. Az elegyet 37 C° hőmérsékleten 4 óra hosszat élénken keverjük, majd percenként 2700 fordulattal 15 percig centrifugáljuk. Az abszorbeálatlan maradékokból kapott (1) csapadékot alkohollal mossuk, majd szárítjuk. 30 Ily módon 2550 mg száraz anyagot kapunk. A fenti művelet során kapott szupernatáns folyadékot i(2) egyenlő térfogatú alkohollal elegyítjük.- Voluminózus csapadék képződik. Ezt centrifugálással elkülönítjük, a szupernatáns fo-35 lyadékot i(3) eltávolítjuk, a csapadékot <4) pedig vízben oldjuk, majd az oldatot liofilizáljuk. Ily módon 280O> mg száraz terméket kapunk, amelynek elemzési adatai: 40 nukleinsav 7%, fehérjék 92%. Ezt a terméket intravénás injekcióban, 4 mgos adagokban beadtuk a jól kifejlett „180" 45 szarkomával fertőzött egereknek; a kezelt 20 állat közül 18-nál a tumor messzemenő nekrózisát tapasztaltuk. A kezelt állatok közül 10 azután 10 nap alatt teljesen meggyógyult. 50 17. példa: A il4. példában említett (3) termék 10 g-ját 100 ml só oldattal hígítjuk, a pH-értéket 2-re állítjuk be sósav oldattal, majd 100 ml pepszint 55 adunk hozzá. Az elegyet 37 C° hőmérsékleten 4 óra hosszat kezeljük, majd 7 pH-értékre semlegesítjük és 100 mg „Difco" tripszint adunk hozzá. Az elegyet ismét 4 óra hosszat tartjuk 37 C° hőmérsékleten, majd percenként 8000 60 fordulattal !30 percig centrifugáljuk. Az abszorbeálatlan maradékokból kapott (1) csapadékot alkohollal mossuk és 'megszárítjuk. 1350 mg száraz anyagot kapunk. A fentiek során kapott szupernatáns folya-65 dékot i(2) egyenlő térfogatú alkohollal elegyít-7