154246. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,2-dehidroszteroidok előállítására
3 154246 4 átmérőjű telepek. Nem növekszik Sabouraud-táptalajon. Marhahúskrém levesben 2ß°-on 24 óra múlva egyenletesen zavarosít, később üledéket képez. Igen jó növekedés 10% nyúlsavót tartalmazó bouillonban. Löffler-féle táptalajon jól nő, piszkos-fehér összefolyó nyálkás tenyészetet képez. Tojás táptalajon fényes, összefolyó, halvány sárgás-rózsaszín, glicerines-burgonyán 3—4 nap alatt nyálkás, összefolyó sárgás-rózsaszín, vastag növekedés. Jól nő pepton-vízben. Optimális tenyésztési hőmérséklet 30 C°. Jól nő 20 C° és 37 C° közötti hőmérsékleten is. Lassan kinő 10°-on. 45°-on nem növekszik 14 nap alatt. Jól szaporodik pepton-vízben pH 6 és 9,6 között. Szaporodik 3—4% NaCl, nem szaporodik 6,5% NaCl jelenlétében. A tejet enyhén lúgosítja, semisolid agárban nem mozog. 60°-on 30 percig életben marad, 60 perc alatt elpusztul. Biokémiai reakciók: Catalase ++ Oxidase + Nitrát redukció nitritté •' + Zselatin folyósítás — Keményítő hidrolízis — Kazein — H2 ,S képzés tioszulfátból — Indol — Metilvörös 20° — Voges-Proskauer 28° — Urease + ,(+ = pozitív reakció, H—f- = erős reakció, — = negatív reakció.) Ezek alapján a törzs a Corynebacteriaceae család Corynebacterium genusába tartozik s mind kulturálisan, mind biokémiailag a Corynebacterium equi irodalomban leírt tulajdonságaival rendelkezik. A találmány eljárás /^-szteroidok előállítására mikrobiológiai oxidációval, amely abban áll, hogy az oxidálást Corynebacterium equi (VB) jelű mikroorganizmussal végezzük, és a keletkezett 1,2-dehidro-szteroidot önmagában ismert módszerekkel elkülönítjük. Az organizmus növesztésére megfelelő táptalaj karbonforrásként szénhidrogént vagy glicerint, nitrogénforrásként proteintartalmú anyagokat, mint húskivonatot, élesztőkivonatot, peptont, vagy más aminosavakat, mint aszparagint, glutaminsavat, ezen kívül növekedési faktorként élesztőkivonatot, kukoricalekvárt, végül fémionokból álló sóoldatot, esetenként pedig foszfátot tartalmazhat. Az organizmus növesztését előnyösen 28 Cö -on aerob körülmények között végezhetjük. Kétnapos növekedés után a tenyészet konstitutív dehidrogenáz-aktivitása oly magas, hogy lehetségessé válik hígított tenyészettel a szteroid dehidrogénezése. Esetenként az oxidációs közeghez a szteroid szubsztrátummal egyidejűleg klorocidot is adagolhatunk a dehidrogénezés folyamán felléphető fertőződés elkerülése végett. 10 15 20 25 30 .35 40 45 Egyes, dehidrogénezés után gyorsan tovább oxidálódó hasznos szteroid termékek lebomlásának kivédése érdekében a szubsztrátummal együtt ^-naftol-t adagolva előnyösebb kitermeléshez jutunk. Eljárásunk szemléltetésére szolgáló példáinkban CSp, KA12 , MSv/j, SA^-g táptalajokat használtunk. Az egyes táptalajok összetételét az alábbiakban közöljük: CSp táptalaj: 0,44% KH2 P0 4 , 0,88% Na2 P0 4 • 7H2 0, 2,0 % sörélesztő-jkivonat szárazanyagtartalom. KA12 táptalaj: 0,1% aszparagin, 0,2% kukoricalekvár, 0,4% élesztőkivonat szárazanyagtartalom, 0,5%, glukóz, 0,1% KH2 P0 4 , 1,0% „nyomelemoldat", pH sterilezés előtt 6,5—7,0 érték közé állítva. „Nyomelemoldat" a KA12 táptalajhoz: 1 g CaCl2 , 10 mg CaNOa, 88 mg ZnS04 , 3,9 mg CuS04 , 1 mg NiS04 , "" 0,8 mg Na2 B 4 0 7 , 0,72 mg MnCl2 , 0,37 mg (NH4 ) 6 Mo,0 24 , 1,0 img FeS04 , 1 l-re desztillált vízzel feltöltve, sterilezve, MSv// táptalaj: 0,5% kukoricalekvár, 2,0% glukóz, 0,6% aszparagin, 0,4% glutaminsav, pH sterilezés előtt: 7. 50 SA5 -g táptalaj: 5% pepton, 1% húskivonat, nyomnyi sörélesztőkivonat szárazanyag, 55 pH sterilezés előtt 6,7—7,0 érték közé állítva. Az oxidáció előrehaladásának követésére a 150 244 számú és a 145 921 számú magyar sza-60 badalmi bejelentésekben közölt tioszemikarbazonos, ill. kromogénes analitikai eljárásokat, valamint Mizsei—Szabó kromogénes prednizolon meghatározási módszerét [J. Biochem. Microbiol. Tech. Ing. 3, 119 (1961)] alkalmaztuk. 65 A szteroidok átalakítását esetenként kvanti-2
