154162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tetraciklin-csoportba tartozó tiszta antibiotikumok előállítására
154162 11 12 tölcséren leszűrjük. A csapadékot 100 ml oly desztillált vízzel mossuk, amelyhez előzőleg 1 ml 10%-os sósavat adtunk. A mosott csapadékot levesszük a szűrőről és 800 ml desztillált vízben szuszpendáljuk. A szuszpenzió pH-értékét 10%-os nátriumhidroxidoldattal 8,5-re állítjuk. A szuszpenziót ezután leszűrjük és a szűrőanyagot tartalmazó csapadékot oly desztillált víz 500 ml-jével mossuk, amelyhez előzőleg 20 ml 10%-os nátriumhidroxidoldatot adtunk 9,0 és 10,0 közötti pH-érték elérése céljából. A szűrőanyag mosása során kapott szűredéket egyesítjük a szűredék főtömegével, majd az antibiotikum volfrám-komplexét 20%-os sósav hozzáadásával ismét kicsapjuk. A sósavat fokozatosan adjuk hozzá, 1,5 és 2,0 közötti pH-érték eléréséig. A levált komplexet 100 g Dicalit hozzáadásával ismét leszűrjük és 100 ml oly desztillált vízzel mossuk, amelyet előzőleg megsavanyítottunk, 1 ml 10%-os sósavval. A kapott és mosott csapadékot 100 ml desztillált vízben szuszpendáljuk, majd a szuszpenzió pH-értékét 10%-os nátriumhidroxidoldat hozzáadásával 8,5 és 9,5 közöttire állítjuk és ismét szűrünk. A csapadékot 400 ml 9,0—10,0 pH-értékű vízzel (30 ml 10%K)s nátriumhidroxidoldat 400 ml desztiUált vízre) mossuk. A szűredékeket egyesítjük és tovább dolgozzuk fel. A szűrőn maradt csapadékot kiselejtezzük. A szűredéket 20%-os sósavval 7,5 pH-értékre savanyítjuk, 60 g szilárd ammóniumkloridot, majd 200 ml 20%-os magnéziumkloridoldatot adunk hozzá, majd a pH-értéket eseppenként hozzáadott 10%-os nátriumhidroxidoldattal 8,0 és 8,2 közé állítjuk be. A klórtetraciklin levált magnéziumsóját 50 g Dicalit hozzáadásával leszűrjük. A kapott csapadékot 80 ml oly vízzel mossuk, amelyhez előzőleg 1 g magnéziumkloridot adtunk. A szűredékeket félretesszük és később a volframát visszanyerésére hasznosítjuk. A klórtetraciklin mosott magnéziumsóját levesszük a szűrőről és vákuumban, 30—40 mm Hg-oszlop nyomás alatt, 40—45 C° hőmérsékleten megszárítjuk. A megszárított magnéziumsót metanollal extraháljuk, erre a célra fokozatosan hozzáadott 3 liter oly metanolt alkalmazunk, amelyhez előzőleg 30 ml tömény sósavat adtunk. A sósavas kivonatokat egyesítjük és bennük szuszpendált szűrőanyag eltávolítása céljából leszűrjük. A leszűrt sósavas kivonathoz 4 g aktívszenet adunk, 40 C° hőmérsékletre melegítjük és gyorsan leszűrjük. A csapadékként elkülönített aiktívszenet 80 ml megsavanyított metanollal mossuk. A szűredékeket egyesítjük és 2,2 liter metanolt ledesztillálunk, majd 60 ml tömény sósavat adunk hozzá és tovább desztilláljuk a klórtetraciklin-hidroklorid kikristályosodásának megkezdéséig. A kristályosodás rendszerint 600—700 ml metanol ledesztillálása után kezdődik meg. Lehűléskor a klórtetraciklin-hidroklorid kikristályosodása folytatódik. A kivált kristályokat szűréssel elkülönítjük és 20 ml hideg metanollal mossuk. Ily módon 20,8 g klórtetraciklin-hidrokloridot kapunk, 810 gamma/mg tisztasági fokban. 4. példa 10 liter fermentációs levet a fermentáció befejezése után 20%-os sósavval 2,6 pH-értékre J0 savanyítunk, majd „Dicalit 4108" szűrőanyagot adunk hozzá és leszűrjük. A csapadékot sósavval 1,5—2,5 pH-értékre savanyított vízzel szuszpendáljuk és újból leszűrjük. Az első és második szűredéket egyesítjük. A klórtetraciklin 15 mennyisége az egyesített szűredékben 5039 gamma/ml. További feldolgozás céljaira 5 liter szűrt fermentációs levet veszünk és ehhez 2,0 pH-érték eléréséig 10%-os sósavat adunk. Ezután tömény 20 Na2 W0 4 -2H 2 0 oldatot adunk hozzá, az antibiotikumhoz képest 1,3 : 1 mennyiségi arányban, vagyis 32,8 g Na2 W04v2H 2 0 kerül így hozzáadásra, majd az elegy pH-értékét 10%-os sósavval ismét 2,0-ra állítjuk be. 25 A csapadékot ülepedni hagyjuk, majd leszűrjük. A szűredékben visszamaradt antibiotikum mennyisége 27 gamma/ml, így tehát az antibiotikum 99,47%-át leválasztottuk a fermentációs léből. 30 A klórtetraciklin volframát-ionokkal képezett komplexét tartalmazó csapadékot levesszük a szűrőről és 1 liter desztillált vízben szuszpendáljuk, majd lassan annyi 10%-os nátriumhid-35 roxidoldatot adunk hozzá, hogy a pH-érték 8,5 legyen. Az oldatot leszűrjük és a szűredéket lassan hozzáadott 10%-os sósavval 1,5 és 2,0 közötti pH-értékre állítjuk be. A levált komplexet ismét leszűrjük, a csapadékot a szűrőről 40 levesszük, 2 liter vízben szuszpendáljuk és 10%os nátriumhidroxidoldattal 7,5 és 8,0 közötti pH-értékre állítjuk be. Ezt az alkalikus oldatot egy 4 cm átmérőjű és 800 g Duolite C-25 kationcserélőt tartalmazó 45 oszlopon folyatjuk keresztül. Az átfolyatási sebesség 20 ml/perc. Az oszlopról lefolyó oldatot félretesszük és a volframát visszanyerésére hasznosítjuk. Az antibiotikumot 4 liter n ammóniumhidroxidoldattal 50 eluáljuk. A kapott eluátumot vákuumban (30 ml Hg-oszlop nyomás alatt), 45 C° hőmérsékleten 1,4 liter térfogatra bepároljuk. Ezt a koncentrált oldatot 1 liter desztiUált vízzel hígítjuk, majd 15 ml/perc átfolyatási sebességgel 55 átfolyatjuk egy 2 cm átmérőjű és 300 g Amberlite IRC 411 anioncserélővel töltött oszlopon, a volframát-ionok utolsó nyomainak eltávolítása céljából. Az eluátumot vákuumban (30 m Hg-oszlop), 60 40—45 C° hőmérsékleten 800 ml térfogatra töményítjük be. A tömény oldathoz 1,5 pH-érték eléréséig tömény sósavat adunk, majd ismét bepároljuk a kristály-4dválás megkezdéséig. Ezután az oldatot nátriumkloriddal telítjük és 65 lassan lehűlni hagyjuk. A levált klórtetracik-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
