154162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tetraciklin-csoportba tartozó tiszta antibiotikumok előállítására
» 13 lin-hidroklorid kristályokat szűrés útján elkülönítjük és 20 ml hideg desztillált vízzel mossuk. Ily módon 27,1 g klórtetraciklin-jhidrokloridot 5 kapunk, 890 gamma/mg tisztasági fokban. Átkristályosítás után a kapott termék tisztasági foka 960 gamma/mg, az antibiotikumJ hozam 82% {a fermentációs lében jelenlevő összes antibiotikum mennyiségére számítva). 10 5. példa A 4. példa szerinti módon kapott 5 liter fermentációs léből indulunk ki, amelynek klartet- 15 raciklin-tartalma 5039 gamma/ml. A 4. példában leírt módon dolgozunk, csupán azzal az eltéréssel, hogy a lecsapáshoz Na2W0 4 • 2H2 0 helyett kálium-metavolfráma tot i(K2W 4 0 13 • 8H2O) alkalmazunk, a jelenlevő klórtetraciklin meny- 20 nyiségére számítva 1,2:1 mennyiségi arányban. Átkristályosítás után tiszta klórtetraciklin-hidrokloridot kapunk, 980 gamma/mg tisztasági fokban. A kristályosítás után kapott antibiotikum-hozam 82%. 25 6. példa 2 liter oxitetraciklin-fermentációs levet, amelyből a micéliumot eltávolítottuk és amely- 30 nek oxitetraciklin-tartalma 6200 gamma/ml, 17 g Na2 W0 4 -2H 2 0 100 ml desztillált vízzel készített oldatával elegyítünk, majd az elegy pH-értékét 10%-os sósavval 2,0-ra állítjuk be. A képződött csapadékot 4 óra hosszat állni 35 hagyjuk, majd leszűrjük. A szűrőről levett csapadékot 700 ml desztillált vízben szuszpendáljuk és 10%-os nátriumhidroxidoldatot adunk 8,5 pH-érték eléréséig hozzá, amikoris a csapadék ismét oldódik. 40 A csapadék oldása után az antibiotikum volframát-komplexét 20%-os sósav 1,5 pH-értékig történő hozzáadása útján ismét lecsapjuk. A levált komplexet 6 óra hosszat állni hagyjuk, majd a csapadékot leszűrjük és megsava- 45 nyitott vízzel (pH = 1,5) mossuk. A mosott csapadékot levesszük a szűrőről, desztillált vízben szuszpendáljuk, majd 10%-os nátriumhidroxidot adunk a csapadék teljes oldódásáig hozzá; a pH-érték ennek során 9,0-ra 50 emelkedik. Az oldat pH-értékét 20%-os sósav hozzáadásával 7,5-re csökkentjük, majd 40 g szilárd ammóniumkloridot és rögtön ezután 70 ml 20%-os kalciumkloridoldatot adunk hozzá, majd 55 8,0 és 8,2 közötti pH-érték eléréséig 10%-os nátriumhidroxidoldatot csepegtetünk az elegyhez. A képződött csapadékot 6 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük. A csapadékot 1 g 60 kalciumkloridot tartalmazó 60 ml desztillált vízzel mossuk. A szűredéket félretesszük és a következő műveletek során az antibiotikum újbóli leválasztására vagy a volframát regenerálására használjuk fel. 65 14 A mosott oxitetraciklin-kalciumsót vákuumban (30—40 mm Hg-oszlop nyomás alatt) 40 Cc hőmérsékleten megszárítjuk. A száraz kalciumsót több részletben extraháljuk összesen 2,5 liter metanollal, amelyhez előzőleg 25 ml tömény sósavat adtunk. A metanolos kivonatokat egyesítjük, leszűrjük és 40 C° hőmérsékleten 10 g aktívszenet adunk hozzá. Az aktívszenet azután kiszűrjük és 100 ml megsavanyított metanollal utánamossuk. A metanolos kivonatot egy 200 g Amberlite IR 110 gyantával (kvaternér ammóniumcsoportokat tartalmazó polisztirol-vázú ioncserélő) töltött oszlopon folyatjuk keresztül, majd az oszlopot 200 ml metanollal mossuk. Az oszlopról távozó folyadékot vákuumban 1 liter térfogatra pároljuk be, 40 ml tömény sósavat adunk hozzá, majd a kristálykiválás megkezdéséig tovább desztilláljuk. A lehűlés során a kristályosodás folytatódik, ebből a célból kb. 10 óra hosszat hagyjuk az oldatot állni. Ily módon 89%-os termelési hányaddal a 900 gamma/mg tisztasági fokú oxitetraciklin-hidrokloridot. 7. példa 2 liter fermentációs levet, amelyet a 6. példában leírt módon kaptunk, a 6. példában leírthoz hasonló módon dolgozunk fel, csupán azzal az eltéréssel, hogy a lecsapáshoz 14 g ammónium-metavolf ramátot (NH4)2 W 4 Oj3 • 8H2 0 használunk és a kalciumsó extrahálását metanol helyett 2 liter izobutilketonnal végezzük, amelyhez előzőleg a telítéshez elegendő mennyiségű vizet és 30 ml tömény sósavat adtunk. Ily módon 92%-os termelési hányaddal kapjuk a 800 gamma/mg tisztasági fokú oxitetraciklin-hidrokloridot. 8. példa 10 liter fermentációs levet, amelynek oxitetraciklin-tartalma 4100 gamma/ml, mentesítünk a micéliumtól, az 1. példában leírt módon. A további feldolgozáshoz 5 liter ily módon előkészített fermentációs levet veszünk és ennek pH-értékét 10%-os sósav hozzáadásával 1,0-ra csökkentjük, majd 30 g Na2 W0 4 -2H 2 0 tömény oldatát adjuk hozzá és a pH-értéket 10%,-os sósavval ismét 1,0-ra állítjuk be. A csapadékot 4 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük. A szűredék 41 gamma/ml oxitetraciklint tartalmaz, így tehát az eredetileg jelen volt antibiotikum -99,49%-a került leválasztásra. A csapadékot levesszük a szűrőről, 800 ml desztillált vízben szuszpendáljuk és 10%-os nátriumhidroxidoldatot adunk hozzá 8,5 pH-érték eléréséig. Ezután leszűrjük az oldatot és a szűredékhez lassan adunk annyi 10%-os sósavat, hogy a pH-érték .1,0 legyen. A levált komplexet ismét leszűrjük, a szűredéket kiselejtezzük, a csapadékot a szűrőről levesszük és 1 liter desztillált vízben ismét szuszpendáljuk, majd a szuszpenzió pH-értékét 10%-os nátrium-7
