154080. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum előállítására

154080 8 juk EmerÄcellopsis synntemiatioola vagy E. pooniensis 48-órés vegetatív tenyészetéivel. A felhasználandó inokulumot előzőleg rlázólombikokban növesztettük és mikroszkóp alatt ellenőriztük a megfelelő intenzitású növekedés szempontjából. Az 50 1 táptalajt a növekedési periódus alatt levegőztetjük és keverjük, és a műveleteket sterilis feltételek mellett folytatjuk le. A táptalaj térfogategységére vonatkoztatva peroenként 0',!5 térf. levegőt használunk. 48 ória hosszat tartó növesztés után az inokulumot átvisszük egy olyan fermentorba, amely 1000 1 alábbi összetételű táptalajt tartalmaz: Szájailiszt 2,5 % Glukóz 3,0 % AjmmóniuoTHszuilfát 0,5 % Nátrium-klorid 0,25% Kalcium-karbonát 0,5 % pH 6,5—6,8 10 15 20 25 30 40 A közeget nyomás alatt végzett hevítéssel kb. 120 C°-on 30 percen át sterilizáljuk. A hőmérsékletet 2(8 CVa csökkentjük, és az 50 1 inokulumot az edényből csíraimienties körülmények között átvisszük a fermentorba. A növekedési periódus alatt a táptalajt keverjük, és a táptalaj egységnyi térfogatára vonatkoztatva percenlként 0,6—1 térf. stjeiriiis levegőt fújunk rajta keresztül. A miiicélium, növekedését és az antilMotikum-termeiést időről időre gravimetriás módszerrel ellenőrizzük. 96—120 óra eltelte után — ami a növekedés- 35 hez szükséges szokásos időtartam — a tápoldat pH-ját 5-re állítjuk be, és a tápoldiatot leszűrjük. A szüredéklat összegyűjtjük, és 1/3 térfogat n-^butanollial extraháljuk; az alapos elegyedéshez és az antibiotikumnak a táptalajból az oldószerbe vtaló átviteléhez extráktort használunk. A micléliumot szintén hasonló módon extrlaháljuk; először 1,5 liter butanolt, majd a íruásodik extrakcióhoz 1 liter butanolt használunk 1 kg miúéliumra számít- 45 va, Keverés mellett végzett alapos extrahálás után a butanolt leszűrjük, ós a szűrtetet elegyítjük a tápoldat szüredékéiiek butanolos extraktuinával. Az összegyűjtött butanolos extraktumokat vizes mosásnak vetjük alá, hogy 5ü a sókat stb. eltávolítsuk, majd vákuumban kb. 30 1 térfogatra tömlényítjüte be őket. A kiindulási butanolos oldat térfogata kb. 600 1. Nagymennyiségű zagy Válik ki, amely maga a nyers antibiotikum. A zagyot leszűrjük, vizes ace- 55 tonnái mossuk, majd szárítjuk. A zagy szűrése után a butanolos oldathoz háromszoros menynyiségű acetont adunlk, és az oldatot 24 órán át 10 C° hőmérsékleten tartjuk. A krémszerű sárga csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk és 60 szárítjuk. Az így kapott nyers Antiamoiébin-t vízzel mindaddig mossuk, amíg halványsárga színű anyagot nem, kapunk, míajd meleg 45%-os metanolban oldjuk és. vízfürdőn 50 C°-on tart- 65 juk. AntiamoefairMfelesleget adunlk hozzá, amíg további oldódás már nem következik be. Aktívszenet (a metanolos extraktum 1%-a) adunlk az oldathoz, mlajd melegen leszűrjük. Ezután az oldatot 3i—4 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd éjjelen át 5 C°-ön állni hagyjuk. Nagy mennyiségű tűalákú kristály válik csomókban ki, amelyeket szűrünk, desztillált vízzel mosunk, majd szárítunk. Második átkristályosítást is végezhetünk ennek az eljárásnak a megismétlésével. 2. példa: A fermentációs eljárást az 1. példában ismertetett módon folytatjuk le. Az antibiotikum túlnyomó részét tartalmazó micéliuimot a táptalaj pH^jának 5-re való beállítása után szűrjük. A mioéliumcrt mossuk és metanollal extraháljuk; az első extrahálásboz 1 kg mioéliuimra vonatkoztatva 1,5 liter metanolt, és a míásodík extrakció során 1 kg mitíéliumra vonatkoztatva 1 liter metanolt használunk:. A metanolt szűrjük, és az extraktumokat összegyűjtjük. Az összegyűjtött extraktumot 0,5% aktívszénnel kezeljük (színtelenítés), majd szűrjük. Ezután az extraktumot 45—50 C° hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Ez azért lehetséges, mert a metanolos extraktumban víz van jelen. A metanolos extraktum 600 liter térfogiatát 30 literre csökkentjük. Az Antiamoebin fehér zagyként válik ki, melynek legnagyobb része kristályos. A nyers kristályokat szűrjük:, vízzel mossuk és szárítjuk. A nyers kristályokat 45 %-os mietianolban vagy etanolban oldjuk, csontszénnel kezeljük, szűrjük, majd átkristályosítjuk az 1. példa szerinti módon. A táptalaj szüredékét aktívszénnel kezeljük (Norit SG), a tápoldat 1 literére 2 g aktívszenet hasznaivá. Keverés után az oldatot szűrjük. Az intibiotikumot butanollal, metanollal vagy etanollal eluáttijuk. Az eiuátuimot szárazra pároljuk', és ebiből a nyers szilárd anyagból az Antiamoebin-t átkristályosítással tiszta állapotban nyerjük ki. 3. példa: A fermentációs eljárást az 1. és a 2. példa szerinti módon folytatjuk le, és a mioéliumot etil- vagy metil-celloszolwal extraháljuk. A nyers antibiotikumot az extraktum koncentrálásaival kapjuk, majd további feldolgozással és tisztítással a tiszta kristályos anyagot kapjuk. 4, példa: A fermentációs eljárást az 1. és 2. példa szerinti módon folytatjük le, és a mioéliumot vizes aeetonnal vagy dimlötil-formamiddál extráinál juk. Az extraktum betöményítéslével a nyers antibiotikumot kapjuk amelyet tisztítunk és kristályosítunk. 4