153906. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acil-amino-vegyületek előállítására
153906 10 la. táblázat 7-Cián-iacetil-ammo-oefaIosparánsav (I) és Cephalothin (=7-tienil-acetil-amino-oefalosporánsav, II) minimális gátló koncentrációi (gamma/ml) baktériumokkal szemben (inokulumnagyság = 1 :10-es hígítás) Staph, aureus Esch. coli Salmonella II I II 14 2999 2 a 0,25 0,5 Klebsiella 327 330 15 15 15 15 203 15 205 15 30 209 8 15 271 273 4 8 4 8 277 30 60 Psuedomonas Proteus 15 313 500 500 253 250 500 A törzsek számainak jelentése: 14 2999 271 273 271 327 330 313 St. aureus Smith G-penicillinnel szemben rezisztens St. aureus Salm, typhosa Salm, typhimurium Kl. pneumoniae A típus Kl. pneumoniae Psuedomonas aeruginosa 253 = Proteus vulgaris 2. példa 5,10 g ,(15 millimól) 7-cián-acetil-ammo-cefalosporánsavat 102 ml desztillált víziben felszuszpendálunk, és keverés közben cseppenként adagolt 15 ml 1 n nátronlúggal nátriumsóvá alakítjuk. A kapott tiszta oldatot három órán át keverjük Bacillus subtilis ATOC 6633 (előállítási szám: G 14 lßß/63) 2,5 g sejt-liofilizátumával szobahőmérsékleten a pH-nak' konstans 7,3 értéken való tartása mellett. Az enzimatikus elszappanosítás közben felszabaduló ecetsavat önműködő titrátorral semlegesítjük 1 n nátronlúg hozzáadása útján; fogyás: 14,6 ml (az elméleti érték '97,4%-a). A szappanosítási reakció befejezésekor hozzáadunk 130 ml metilén-kloridot a reakcióéi egyhez, erősen rázzuk, majd az emulziót oentrifugálással szétválasztjuk. A felülúszó tiszta, vizes fázis gyakorlatilag kvantitatív kitermeléssel tartalmazza nátriumsó alakjában a dezaicetil-7-cián-aeatil-amino-cefalosporánsavat, amit a vékonyréteg-kromatográfiai elemzés bizonyít. A szabad sav elkülönítése céljából a vizes fázist elválasztjuk, nátrium-kloriddal telítjük, 0 C°-ra való lehűtés után 40%-os foszforsavval pH 2,l-re savanyítjuk és jéghideg 1-butanollal kirázzuk. A kivonatokat rotációs bepárlóban gyorsan bepároljuk 0,1 Hg mm nyomásán. A kapott száraz maradékból a dezacetil-7-cián-acetil^amino-cefalosporánsavat eoetészrfcerrel való kioldás útján elkülönítjük a szervetlen sóktól. Az alábbi táblázatban megadjuk a dezacetil-7--cián-acetil-amino-oef,alosporánsav (I) és a 7-cián-acetil-amino-cefalosporánsav (II) R/-értékeit. 10 25 20 35 40 45 50 55 60 65 2. táblázat Rendszer I II n-Butanol-ecetsav (10:1) 5 vízzel telítve 0,16 0,20 Etilacetát-piridin-ecetsav-víz (62:21:6:11) 0,16 0,33 n-Butanol-piridin-ecetsav-víz (38:24:8:30) 0,61 0,65 10 3. példa 64 mg (0,2 millimól) dezacetil-7-cián-acetil-amino-cefalosporánsavas nátriumsóra 2 ml trifiuor-eoetsavat öntünk, 10 percen át 0 C°-on állni hagyjuk, majd a trifluor-ecetsavat vákuumban eltávolítjuk. A maradékot ecetészterben felvesszük, egymás után mossuk 4%-os nátrium-h'idrogén-karbonát-oldattal, majd 10%-os nátrium-klorid-oldattal semleges kémhatás eléréséig, az ecetészter-oldatot nátrium-szulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban lehajtjuk. Ilyen módon a dezacetil-7-cián-aeetil-amino-cefalosporánsav V képletű laktonját kapjuk, amely acetonból való átkristályosítás után 223—224 C°-on olvad (bomlással). A vízzel telített n-butanol-ecetsav (10:1) rendszerben az Rf-érték 0,42, míg az ecetsavas etilészter-piridin-ecetsav-víz (62:21:6:11) lendszerben az R/^érték 0,47. 4. példa Nyers dezacetil-7-cián-acétU-amm'O-celfalosporánsav i(I) 14,07 g trietü-ammóniumsóját 140 ml frissen gázmentesített dimetil-formamidban felvesszük, hozzáadunk 16 ml tributilamint és 108 ml 10%-os béta-klór-etil-hidrocianát-oldat'Ot dimetil-formiamidban, és négy órán keresztül keverjük 22; C° hőmérsékleten. A reakcióelegyet 0,1 Hg mm vákuumban bepároljuk. A maradékot 10%-os vizes dikálium-hidrogén-foszfát-oldatban felvesszük és ecetészterben kirázzuk. A vizes fázist tömény sósavval pH 2,0-ra állítjuk, konyhasóval telítjük és ecetészterrel extraháljuk. A nátrium-szulfát fölött szárított extraktum bepárláskor közel tiszta 0-dezacetil-0-(béta-klór-etil-karbamoil)-7--cián-aoetil-amino-cefalosporánsavat (II) ad, melynek képletét a VI. képlet mutatja. A terméket szilikagéles kromatogr.áf iával tisztítjuk. Az ekkor eoetészterrel eluálható anyag aceton és éter 1:2 arányú elegyéből kristályosítható; op.: 147—150 C° (bomlással). A következő tulajdonságokkal rendelkezik: ultraibolya abszorpciós spektrum 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát oldatban: lambdamax =260 millimikron (epszilon = 9200); vékonyréteg-kromatográfia szilikagélen [1. rendszer: h-butanol-jégecet (10:1) vízzel telítve; 2. rendszer: n-butanol-piridin-jégecet-víz (38:20:8:30)j. R/ értékek Kiindulási anyag (I) Termék (II) 1. rendszer 2. rendszer 0,21" 0,39 0,62 0,72 3
