153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
153664 9 10 A számjelzésekkel megadott vékonyrétegű kromatográfiai rendszerek az alábbi összetételűek: 43A rendszer: tercamilalkohol-izoproponol-víz (100:40:10); 4'3C rendszer: tere.amilalkohol-izopropanol-víz (100:40:05): 52 rendszer: n--butanol-jégeoel>víz: (100:10:30); 1Ó0 rendszer: etilacetát-piridin-jégecet-víz 1(62:21:6:11); 101 rendszer: n-butanol-piridin-jégecet-víz (30:20:6:24); 102 rendszer: etilacetát-m etiletilketon-hangya -sav-víz (50:30:10:10); 110 rendszer: etüaoetát-n-butanol-piridin-jégecet-víz (80:40:40:12:19). A példákban az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk a védőcsopoirtok megjelölésére: Z = karboibenzoxi-csoport BOC = tercbutiloxilkarbonil-csoport tBu = terc.bütil-csoport. 1. példa: a) terc.Butiloxikarbanil-D-szerin-!hidrát 10,5 g (0,1 mól) D-szerint feloldunk 50 ml 2-n nátriumhidroxidoldatban és ehhez az oldathoz 15,7 g (0,11 mól) tere.ibutiloxikarbonilazid 50 ml metonoUal készített oldatát adjuk. Ezután keverés közben, 40° hőmérsékleten, 4 óra alatt hozzácsepegtetjük 11,1 g (0,11 mól) trietilamin 100 ml metanollal készített oldatát. Az; elegyet 40° hőmérsékleten további 2 óra hoszszat keverjük, majd a keverést éjjelen át szobahőmérsékleten folytatjuk, azután 2 n sósavoldat hozzáadásával - 6—7 pH-értékre állítjuk be, majd a metanolt vákuumban 30° hőmérsékleten elpárologtatjuk. A visszamaradt vizes oldatot etilacetáttal felülrétegezzük és 0° hőmérsékleten, keverés közben tömény sósav hozzáadásával 1—2 pH-értékre állítjuk be. Az etilacetátos fázist gyorsan elkülönítjük, telített nátriumkloridoldattal többször mossuk, megszárítjuk és vákuumban bapároljuk. 19,8 g olajszerű maradékot kapunk, amely, ha 0° hőmérsékleten kevés vízzel eldörzsöljük, monohidrát alakjában kristályosodik. Ilymódon 15,95 g teriCjbutiloxikarbonil-D-szerin-hidrátot {az elméleti hozam 71%-a) kapunk, amely 50—52°-on olvad. Kevés vízből történő átkristályosítás hatására az olvadáspont nem változik; [«P°D = = +9,1 +1° (c = 1,1 vízben). Ez a termék vékonyrétegű kromatográfiai vizsgálattal egységes anyagnak mutatkozik; R/ 48 = 0,31; R/ 100 = 0,65. b) ferc.Butiloxikarbonil^D-szeril-L-tirozil-L-szeril-nL-metionin-metilészter 8,26 g (20 millimól) L-tirozil-L-szeril-L-metio-nin-metilésztert melegítés közben, 70°-on oldunk 150 ml acetonitril és 10 ml dimetilformamid elegyében, majd az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük le és 4,46 g (20 millimól) tercbutiloxikarbanil-JD-szerint adunk hozzá. Az oldatot —5° hőmérsékletre hűtjük le, keverés 5 közben hozzáadjuk 4,53 g~ (22 millimól) diciklo•hexilkarbodiimid 10 ml aeetonitrillel készített oldatát és az elegyet —5° hőmérsékleten 1 óra hosszat, majd éjjelen át 0° hőmérsékleten-, keverjük. 0,15 ml jégecet hozzáadása után a 10 reakeióelegyet újabb 30 percig keverjük 0° hőmérsékleten, majd a levált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük és a szüredéket 0,1 mm Hgoszlop nyomás alatt bepároljuk. A maradékot etilacetáttal felvesszük, az oldatot 0° hőmérsék-15 léten n-sósavoldattal, majd n-nátriumhidrogénkarbonátoldattal, végül vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradék éterrel eldörzsölve megszilárdul. Metanol és éter elegyéből történő átkristályosítás. után 9,1 20 g terméket (az elméleti hozam 76%-a) kapunk, amely 152^-15l5°-on olvad; [«]20 D = —7,0 ±1° (c = 0,i9 metanolban). A termék vékonyrétegű kromatografálás során a következő R/-értékeket mutatja: R/ kloroform és metanol 0:1 ará-25 nyú elegyében 0,29; R/ 4)3 = 0,78; R/ .100 = 0,85. c) terc.Butiloxikarbonil-D-szeril-L-tirozil-L-szeril-L-metioninjhidnazid so 12 g t(2(0 millimól), terc.butiloxikarbonil-D-szeril-L-tirozil-L-szeril-iL-metionin-rmetilészter 50 ml metanollal készített oldatához 5 ml {0,1 mól) hidrazinhidrátot adunk és az1 elegyet 35 szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 3 óra mólva a levált kristályos hidrazidot szűréssel elkülönítjük, majd vízzel és etanollal mossuk. Ilymódon 9,82 g terméket '(az elméleti hozam 82%-a) kapunk, amely 148—T52°-on olvad. Me-40 tanolból történő átkristályosítás hatására az olvadáspont 150—153°-ra emelkedik; [a ] 20 D == == —6,3 ±1° )(c = 1 metanolban). Ez a termék a vékonyrétegű kromatogramon egységes anyagnak mutatkozik: R/ 43 = 0,65; R/ 52 = 45 0,57; R/ 100 = 0,51. d) terc.Butüoxikarbonil-D-szeril-L-tirozil-L--szeril-L-metionil-(gamma-terc.butil)-L-glutamil-L-histidil-iL-fenilalanil-L-iarginil-50 -triptofanil-glicin 1,43 g (2,4 millimól) terc.butiloxikarbonil-D-szer il-L-tirozil-L-széril-L-rn'etionin-hidrazi dot —10° hőmérsékleten 15 ml dimetilfoirmamidban szuszpendálunk és a szuszpenzióhoz ezen 55 a hőmérsékleten 1,58 ml jéghideg 6 n sósavoldatot adunk. Ezután —8° hőmérsékleten 0,5 ml jéghideg 5 n nátriumnitritoldatot csepegtetünk hozzá és az elegyet —5° és —8° közötti . hőmérsékleten 25 percig állni hagyjuk. Egy-60 idejűleg 1,65 g gamma-terc.butil-L-glutamil-L-"hisztidil-L-fenilalanil-L-arginil-L-triptofanil-H glicint (1,9 millimól, előállítására vonatkozólag vö. 1 310 518; sz. francia szabadalmi leírásunkat) feloldunk 5 ml meleg dimetilformamid-65 ban, az oldatot —10° hőmérsékletre hűtjük le
