153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
33 153664 34 dószer-rendszarben {puffer: 26,5 ml jégecet + 19,25 mg ammóniumaoetát 960 ml vízben) 350 fokozatban, 3—3 ml fázistérfogattal multiplikatív megosztásnak vetjük alá. A 85—116. csövekből (rmax = 100; K= 0,4) egyesítés, szárazra történő bepárlás, a maradék nagyvákuumban 40° hőmérsékleten, történő szárítása útján fehér amorf por alakjában kapjuk a kromatográfiai tisztaságú védett tetrakozapeptidáoetátot. Ez a termék vékonyrétegű kromatografálás során az lalábbi R/-értékeket mutatja: szilikagélen: R/ (43C) = 0,27 R/ (52) = 1,18 alumíniumoxidon: R/ (100) = 0,38. j) H-D-Ser-Tyr-Gly-Met-Glu-'His-Phé-Arg-Try-Gly^Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH 163 mg fenti módon előállított védett tetrakozapeptid-aoetátot feloldunk 3,2 ml 90%-os trifluorecetsavban és 25 percig hagyjuk az oldatot állni 20° hőmérsékleten. Ezután kb. 15 ml vízzel hígítjuk a triklórecetsavas oldatot, kb. 2 ml térfogatra pebároljuk és liofilizáljuk. A szabad tetrakoaapeptid így kapott trifluoracetátját acetáttá való átalakítás céljából kevés vízben oldjuk és egy gyengén bázisos ioncserélő-gyantával (pl. Merck Nr. II) töltött 7,5 mm átmérőjű és 16 cm magas oszlopon, amelyben a gyanta acetát-alakban van, átszűrjük. Az eluátumot kis térfogatra (kb. 2' ml-re) pároljuk be, liofilizáljuk és mgyvákuumban, 40° hőmérsékleten 30 percig szárítjuk. Ilymódon kromatográfiai és elektroforétikus vizsgálattal egyaránt tisztának bizonyuló D-Ser ^Gly^béta'~2 4 -kortikotropin-acetátot kapunk, fehér, amorf poralakú termékként. Ez a termék alumíniumoxidon történő vékonyrétegű kromatografálás során, a 101-rendszerben 0,56 R/-értéket mutat i(a béta1-24 -kortikotropin Rz-értéke ugyanilyen körülmények között 0,51); 6,1 pH-értéken, 16 V/cm feszültségeséssel, piridinaoetát-pufferrel végzett elektroforézis során ez a termék 2 óra alatt 8,6 cm távolságra migrál a katód felé. 8. példa: Szárazampullákba kiszerelt készítményt állítunk elő az alábbi alkotórészekből i(a megadott mennyiségek 1 ampullára vonatkoznak): D-Ser *-bétal ~ 2 4 -kortikotropin-hexaacetát 0,5 mg ZnS04 -7 H 2 0 1,23 mg N;a3 F0 4 -12 H 2 0 1,38 mg mannit 40,0 mg Felhasználás előtt a szárazampulla tartalmát egy oldószerampullába kiszerelt 1 ml desztillált vízzel elegyítjük. Az így kapott szuszpenzió pH-értéke 7,6. 9. példa: Szárazampullákba kiszerelt készítményt állítunk elő az alábbi alkotórészekből :(a megadott 5 mennyiségek 1 ampullára vonatkoznak): D-Ser1 -béta 1_24 -kortikotropin-ihexaacetát 0,5 mg ZnS04 -7 iH 2 !0 1,23 mg 10 mannit 40,0 mg Egy oldószerampullában az alábbi összetételű oldatot szereljük ki: Na3 PH 4 -12 H 2 0 1,38 mg 15 Verséne Fe-3 0,1 mg desztillált vízzel feltöltve 1,0 ml-re. Felhasználás előtt a szárazampulla tartalmát elegyítjük az oldószerampulla tartalmával. Az 20 így kapott szuszpenzió pH-értéke 7,6. 10. példa: Egy ampullába, az alábbi alkotórészekből álló 25 oldatot szereljük ki: D-SerMréta1 _24 -kortikotropin-hexaacetát 0,5 mg zselatin 280,0 mg fenol 5,0 mg desztillált vízzel feltöltve 1,0 ml-re. SO 40 45 11. példa: D-Ser d -béta ! ~ 2 4 -koirtikotropm-hexaacetát sterilre szűrt vizes oldatát aszeptikus körülmények között elegyítjük nátrium-poliflorentinfoszfáttal és nátriumkloriddal, majd ampullákba töltjük és liofilizáljuk. így olyan szárazampullákba kiszerelt készítményt kapunk, amely az alábbi alkotórészeket tartalmazza: D-Ser1 -béta 1_24 -kortikotropin-hexaaoetát 0,5 mg nátrium-polifloretinfoszfát .(86,5%-os) 23,20 mg nátriumklorid 12,28 mg Felhasználás előtt a szárazampulla tartalmát 50 egy oldószerampulláiba külön kiszerelt 2 ml desztillált vízzel elegyítjük. 12. példa: 55 Szuszpenziót állítunk elő az alábbi alkotórész-mennyiségekből : D-Ser1 -béta 1-24 -kortiko | tropin-hexaacetát 1,0 mg 60 ZnCl2 10,5 mg Na2 HP0 4 1,7 mg benzilalkohol 17,0 mg NaCl 2,5 mg NaOH 8,0 pH-értékig 65 desztilláltvízzel feltöltve 2,0 ml-re. 17
