153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására

29 153664 30 P/ (43A) = 0,65 R/ (CHCl3

-metanol 8:2) = 0,68 R/ (101) = 0,77. b) H-Tyr-Gly-OCH3

-hidroklorid 2 g BOC-Tyr-Gly-OCH

3-ot 20 ml absz, etilacetátban melegítéssel oldunk, majd az oldathoz 20° hőmérsékletien hozzáadunk 20 ml absz. etilacetátos 4 n sósavoldatot. Néhány perc múlva csapadék kezd leválni. 30 perces; állás után a reakcióelegyet vákuumban kb. 10 ml térfogatra pároljuk be, majd 50 ml petroléter hozzáadásával a dipeptidészter-hidroklorid kicsapását teljessé tesszük. A levált amorf terméket homogenizáljuk, leszűrjük, petroléterrel mossuk és nagyvákuumban 30° hőmérsékleten megszárítjuk. Az így kapott dipeptidészterhidroklorid higroszkópos por, amely kb. 110—• 115°-on •bomlás, közben olvad. Ez a termék szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az; alábbi R/-értékeket mutatja: R/ (43íA) = 0,33 R/ (CHCl3

-metanol 8:2) =0,36 R/ (101) = 0,60. c) BOC-D-Ser-Tyr-Gly-OCH3 1,69 g H-Tyr-Gly-OCH3

-hidrokloridot 10 ml absz. dimetilformamidban gyenge melegítés közben oldunk, majd az oldatot 0° hőmérsékletre hűtjük le. A lehűtött oldathoz előbb 0,84 ml trietilamint, majd 1,23 BOC-D-Ser-OH-ot, végül 1,65 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd az elegyet 20 óra hosszat keverjük 25° hőmérsékleten, azután még egy óra hosszat 0°-on. A levált trietilammóniumkloridot és diciklohexilkarbamidot kiszűrjük és a szüredéket bepároljük, amikoris olajszerű maradékot kapunk. Ehhez 30 ml etilacetátot és 100 ml petrolétert adunk; ennek hatására a nyers termék kenődő massza alakjában leválik. Előzetes tisztítás céljából ezt a terméket kevés etilacetátban ismét feloldjuk és sok petroléter hozzáadásával lecsapjuk. A kapott 1,8 g nyers termék vékonyrétegű kromatografálással vizsgálva még szennyezettnek mutatkozik. Tisztítás céljából ezt a terméket etilaoetát — benzol — 0,05-m-vizes ammóniumacetá'toldat 2:1:2 arányú oldószerrendszerben Graig szerinti multiplikatív megosztásnak vetjük alá 10—10 ml-es fázis-'térfogatokkal. 250 fokozat után a 45—74. megosztási elemeket elkülönítjük (rmax

= 60; K = 0,32); ezekből az oldószer bepárlása és az; ammóniumacetát nagyvákuumban 45° hőmérsékleten történő szublimálása útján kromatográfiai tisztaságban , kapjuk a tripeptidszármazékot. Metanol és víz elegyéből kristályosítva 180— 182°-on olvadó terméket kapunk. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálással az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (52) = 0,76 R/ (101) = 0,78 R/ (CHClo-metanol 8:2) = 0,58. 5 d) BOC-D-Ser-Tyr-Gly-OH 685 mg BaC-D-Ser-Tyr-Gly-OCH3

-ot 5 mi n-nátriumhidroxidoldatban oldunk, az; oldatot 10 percig hagyjuk; 20° hőmérsékleten állni, 10 majd 5 ml n-sósavoldat hozzáadásával semlegesítjük. A védett tripeptidet 50 ml vízzel telített n-butanollal extraháljuk, a butanolos réteget elkülönítjük, 4—4 ml vízzel négyszer mossuk, majd kb. 3 ml térfogatra bepároljuk. 30 ml 15 petroléter hozzáadása után kenődő csapadékot kapunk, amely etilacetátból kristályosítható; a kristályosított termék 168°-on bomlás közben olvad. Ez a termék vékonyrétegű kromatografálással vizsgálva egységes anyagnak mutatko-20 zik. Szilikagélen az alábbi R/-értékeket adja: R/ (52) = 0,60 R/ (101) = 0,61. 25 e) BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Met-OGH3 425 mg BOC-D-Ser^Tyr-Gly-OH és 240 mg H-Met-OCH3

-hidroklorid elegyét 3 ml absz. dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz 0,168 ml 30 trietilamint adunk, majd keverés közben hozzácsepegtetjük 288 mg diciklohexil-karbodiimid 5 ml absz. etilacetáttal készített oldatát. Az elegyet 15 percig 20° hőmérsékleten tovább keverjük, majd 0°-on 1 óra hosszat állni hagyjuk, 35 azután a levált diciklohexilkarbamidot leszűrjük. A szüredékből 50 ml petroléter hozzáadásával kenődő-csapadék alakjában leválasztjuk a nyers kondenzációs terméket és megszárítjuk. 40 Ezt a terméket Craig-megosztásnak vetjük alá metianol-puffer-klorofarm-széntetraklorid 5:3:5:2 rendszerben (puffer: 28,5 ml jégecet + 19,25 g ammóniumacetát 960 ml vízben); a megosztást 400 fokozattal végezzük 3 ml-es, fá-45 zis térfogatokkal. A 103—134. megosztási elemekből (vmax = 120; K = 0,43) egyesítés, szárazra történő bepárlás és az ammóniumacetát nagyvákuumban 45° hőmérsékleten történő szublimálása útján fehér amorf por alakjában 50 kapjuk a kromatográfiai tisztaságú tetrapeptidszármazékot. Ez a termék szilikagélen tröténő véfconyrétegű kromatografálással az; alábbi R/-értékeket mutatja: 55 R/ (benzol-aoeton 1:1) = 0,21 R/ (kloroform-metanol 86:15) = 0,62, R/ (100) = 0,84. 60 f) BOC-D^Ser-Tyr-Gly-Met-NH-NiHj 160 mg BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Met-OCH3

-ot 1 ml metanolban oldunk, az oldathoz 0,1 ml hidrazinhidrátot adunk és éjjelen át 20° hőmér-65 sékleten állni hagyjuk. A kristálylepénnyé szi-