153639. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új heterociklusos vegyületek (delta8,9- ergolén-8-karbonsav-származékok) előállítására
153639 Minden beoltott teleprészecske körül kis telep keletkezik kezdetben fehér, később vörösbarna mieéliumból. 10 nap elmúltával a hifacsúcsökön •'konidiumok kezdenek lefűződni. 20 nap után elég konidium van jelen .ahhoz, hogy a belőlük készített vizes szuszpenzióval be tudjunk oltani 20 ferdeagar-csövecskét. Ezeket a kultúrákat 24 C°-on inkubáljuk. A konidiumok 24—36 óra elteltével csíráznak. 6 nap után .az agarfelületet finom fehér micélium vonja be egyenletesen, 10 nap elmúltával kialakul egy barnásszürke finoman barázdált mieeliumtaka.ro, amely szorosan ráfekszik az ugarra, és csak rövid léghifái vannak. Ezen konidiumok fűzőidnek le. 12 nap elmúltával a mieéliumban több helyen központok alakulnak ki, amelyeken apró. cseppekben barnásvörös folyadék válik ki. A cseppecskék 1—3 m.m átmérőre nőnek, és hamarosan tej szerűen meg zavarosodnak a nagyszámú konidiumtól. 16—18 nap elteltével a konidiumok keletkezése gyakorlatilag befejeződött. Egy ferdeagarkultúra 2 cm átmérőjű kémcsőben 12 ml agar táptalajjal kb. 10" konidiumot tartalmaz. Alámerített kultúrában való tenyésztéshez először előkultúrát készítünk a következőképpen: Táptalajként 4,5%-os 5 pH-ra beállított vizes malátakivonat-oldatot használunk. 1 liter ilyen oldatot egy 2 literes Erlenmeyer-lombikhan 20 percig 110 C°-on sterilizálunk, majd egy 15 napos agar-kultúrából 6.108 konidiummal beoltjuk, és 3 napig forgó rázógópen 24 C°-on inkubáljuk. Finoim micéliumpelyhekből álló tömött kultúra keletkezik. A pelyhek hifái laza gomolyagából állnak, és átmérőjük 2—4 mm. Alkaloidok nem mutathatók ki bennük. Nagyobb mennyiségű előkultúra előállítására üvegfermentorokat, amelyek 10'—10 liter ugyanilyen táptalajt tartalmaznak, beoltunk 6.1'0!) konidiummal, és 3 napig 23 C°-on percenként 8 liter levegővel szellőztetve és percenként 300 fordulattal kavarva inkubálunk. A habzás megakadályozására szilikon-emulziót használunk. Az így kapott fermentor-kultúrák ugyanolyan jellegűek, mint a rázott kultúrák. Főkultúrakánt az alábbi tápoldat szerbit 50 g borostyánkősav 36 g KH2 PO^ 2 g MgSo-4 0,3 ,g FeSO/,. 7 H2 0 1 mg ZnSO/,. 7 H2 0 10 mg 1 liter desztillált, vízben, ammóniával 5,4 pH-ra beállítva különösen alkalmasnak, bizonyult. Ezt a tápoldatot beoltjuk egy 3 napos előkultúra 10%-nyi mennyiségével, és. 100 ml-es adagokban 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban reciprok működésű rázógépen 23 C°-on inkubáljuk. Más kultúrákat analóg módon 170 liter táptalajt tartalmazó rozsdamentes aoélfenmentorban tenyésztünk. Eközben percenként 170 liter levegővel szellőztetünk, és kezdetben percenként 70, később 180 fordulattal kavarunk. A habzási szilikon-emulzióval akadályozzuk meg. Ily módon számos azonos micéliumrészecské-5 bői álló kultúrák keletkeznek. Ezeknek az átmérője kb. 5 mm, és gömbalakú 1 mm átmérőjű tömör mag-vük van pszeudoparenchimatikus szövetből. Ezen a magon csillagszerűen elrendezett, kb. 2 mm hosszú nyúlványok van-10 n,ak párhuzamosan elhelyezkedő hifákból. A kb. 10 napos tenyészidő végén a micélium, sötétbarna, a szüredék pedig élénk vörösbarnára színezett. A pH-érték csak jelentéktelenül változik. 15 Az így 'kapott kultúra^szüredéknek 620 mg/ liter a kotorimetriásan meghatározott összes alkaloid tartalma, 300-as molekulasúlyra vonatkoztatva. Az alkaloid-keverék papírkroma,tog'ráfiailag megállapított összetétele a követ-20 kező: 6-metil-/l8 ' 9 -erlogén-8-karbonsa'V és csekély mennyiségű lizergsav és izolizergsav 86,5% 25 lizeirgsavamid 3.9% izolizergsavaimid 3,9% ergobazin 1,0% ergobazinm 0,5% klavin-alkaloid 4,2% A 6-metil-zl8 ' 9 -erg.olén-.8~karbonsav a kultúraszüredékből elvben többféle módszerrel különíthető el. Előnyösen kation-kicserélővel, például Dowex 50-nel vagy Amberlite IR 120-sz.al. 35 vonjuk ki a kultúraszüredékből, erről híg ammonias kezeléssel oldjuk le, és az eluátum koncentrálása és az oldat pH-^ér tekének az izoelektromos pontjára való beállítása után kikristályosítjuk. 40 Az I általános képletű, a találmány szerint előállított vegyületek savhőmérsékleten kristályosok vagy amorf ok, és szervetlen vagy szerves savakkal szobahőmérsékleten kristályos, állandó sókat alkotnak. Sőképzésre többek kö-45 zött a következő savak használhatók: sósav, hidrogénbro'rnid, foszforsav, kénsav, fumársav, malemsav, almasav, borkősav és ecetsav. A találmány szerint előállított I általános képletű vegyületek és sóik kitűnően szeroto-50 nin-antagonizmusuk, ocxitocikus, vérnyomáscsökkentő és központi stimuláló hatásuk révén. Alkalmazást találnak a migrének terápiájában, reumás és pszichikus, valamint, vérkeringési zavarok esetén, továbbá szülésnél mint 55 oxitocikum. A naponkénti adag 1—5 mg. Az í általános képletű új vegyületek gyógyszerként önmagukban vagy orális, entrális vagy parenteriális alkalmazásnak megfelelő gyógyszeralakokban alkalmazhatók. Alkalmas 60 gyógyszeralakok előállítására a vegyületeket szervetlen vagy szerves, farmakológiailag közömbös segédanyagokkal egyesítjük. Segédanyagokként felhasználhatók például tablettákhoz és drazsékhoz: tejcukor, keményítő, tal(j5 kum, sztearinsav stb.; szirupokhoz: szacharóz-, 3
